大豆异黄酮配伍叶酸对环磷酰胺致大鼠神经管畸形的拮抗作用及其机制的研究

【作者】 肖荣； 赵海峰； 梁江； 李秀花；

【机构】 山西医科大学营养与食品卫生教研室；

【摘要】 目的研究大豆异黄酮配伍叶酸对环磷酰胺致大鼠神经管畸形的拮抗作用及其机制。方法1.动物整体实验:包括大鼠神经管畸形模型的制备和大豆异黄酮配伍叶酸对其拮抗作用的研究,涉及的检测方法有大体观察、孕鼠血中抗氧化指标及相关营养素的检测、光镜观察、透射电镜观察和免疫组织化学观察等;2.体外神经细胞培养:主要进行三羟异黄酮配伍叶酸对体外环磷酰胺致大鼠神经细胞凋亡的早期干预研究,涉及的检测方法有扫描电镜观察、流式细胞双标检测等。结果1.动物整体实验:(1)以12.5mg/kg的环磷酰胺剂量在大鼠孕13天时给药可以成功建立神经管畸形的模型;(2)模型组孕鼠体内一些抗氧化相关指标如GSH、GSH-PX、Se、Zn及Mn与对照组相比发生了明显的变化,孕鼠体内出现了过氧化;(3)光镜和透射电镜结果显示,胎鼠畸形发生处有大量的凋亡细胞且细胞器发生明显的变化;(4)免疫组化结果可见,环磷酰胺可以导致凋亡基因p53和bax表达的增强;(5)大豆异黄酮配伍叶酸干预效果要优于单独干预效果且存在最佳配伍;(6)二者配伍能显著提高孕鼠的抗氧化能力,上述抗氧化相关指标有显著的变化;并可以增强凋亡基因bcl-2的表达而减弱p53和bax的表达进而减少神经细胞的过度凋亡:2.体外神经细胞培养:(1)流式细胞仪检测结果表明,三羟异黄酮和叶酸在一定浓度下可对神经细胞的凋亡产生明显的抑制作用;(2)扫描电镜对神经细胞早期凋亡阶段所发生的膜变化的观察也支持流式细胞仪检测结果。结论1.利用环磷酰胺12.5mg/kg的剂量在大鼠孕13时给药可以成功建立神经管畸形的模型;2.神经管畸形的发生可能与孕鼠体内过氧化和胎鼠神经细胞的过度凋亡及凋亡基因的高表达有关;3.大豆异黄酮配伍叶酸可以明显提高神经管畸形的防治率,且存在最佳的配伍组合,二者对其预防作用机理可能是改善孕鼠体内抗氧化能力、调节神经细胞的凋亡基因的表达从而抑制神经细胞的过度凋亡等。更多还原