WORT增强γ线对SHG44胶质瘤增殖抑制和凋亡的影响

【作者】 刘芬菊； 薛景； 孙志强； 杨学琴； 俞家华； 蒋亚齐；

【机构】 苏州大学放射医学与公共卫生学院；

【摘要】 <正>目的:细胞基因突变或缺失是影响细胞辐射敏感性的原因之一。SHG44细胞存在PTEN 缺失,而PTEN基因的全称:“磷酸酶和细胞骨架张力蛋白同源物从10号染色体缺失” (phosphatase and tensin homolg deleted from chromosome 10)。研究表明由于PTEN所下调的磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K)通路失衡,PTEN缺失的胶质瘤细胞与正常人的星形胶质细胞相比,内源性蛋白激酶B(PKB)活性高,从而对辐射更耐受。放疗后肿瘤细胞再增殖现象提示辐射可能激活细胞内的相关基因抵抗辐射损伤,研究表明辐射可通过自由基途径和DNA损伤途径激活PKB,Semenza GL等报道辐射产生的活性氧簇(ROS)诱导了HIF-1的激活、VEGF基因的转录,还可诱导产生 bFGF,从而通过PI3K激活PKB。资料证明DNA依赖的蛋白激酶(DNA protein kinase, DNA-PK)、ATM(ataxia telangiectasia mutated,ATM)能激活PKB S473位点的磷酸化, 而DNA-PK、ATM均与DNA损伤后修复有关,且2Gy60Coγ线即可激活ATM。PKB能通过抑制P27和多种凋亡相关蛋白调控细胞周期和抗细胞凋亡。渥曼青霉素 (Wortmannin,WORT)是磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K)的相对特异性抑制剂,文献报道低浓度WORT(<1μmol／L)可以抑制PI3K活性,而高浓度 WORT(>10μmol／L)可以抑制PI3K家族的其他成员包括ATM、DNA-PK、ATR等DNA 损伤修复相关酶的活性,从而可恢复PTEN基因的PI3K／PKB抑制功能,同时阻滞PKB 激活的可能途径。因此本实验的目的是通过观察WORT联合γ线对SHG44细胞周期、增殖、凋亡的影响,探讨PKB与胶质瘤细胞SHG44辐射抗性的相关性。方法:克隆法测定0、0．5、20μmol／L WORT分别与0、2、5、10Gy60Coγ线联合作用, 计算SHG44细胞克隆存活率;流式细胞术测定SHG-44细胞经WORT、60Coγ线处理后细胞周期和凋亡率。照射剂量为10Gy,设0μmol／L-0Gy、0μmol／L-10Gy、0．5μmol／L-0Gy 三组对照,培养48h后检测G2/M、G0／G1细胞比例;LGSM观察0、0．5、20μmol／L WORT 分别与不同剂量60Coγ线作用后诱导细胞凋亡的形态学特征,统计分析采用SPSS,两两比较用u检验。更多还原