苯巴比妥钠预诱导后的肝细胞可能成为生物人工肝的新型肝细胞材料

【作者】 黄庆山； 黄永清； 孙家敏； 陈南清； 瘳红华； 陈静；

【机构】 福建省龙岩市第二医院感染科； 福建省龙岩市第二医院细胞生物实验室； 福建省龙岩市第二医院人工肝治疗中心；

【摘要】 背景:在生物人工肝中,由于生物反应器内正常肝细胞的数量有限,而永生化肝细胞的生物活性低下并对人体存在生物风险,人源性正常肝细胞的来源受体外细胞培养扩增技术的限制,因此,目前国际上已着手诱导提高肝细胞的细胞生物学活性的研究。目的:本课题组近期已报道经苯巴比妥钠(PBS)体内预诱导的正常成年小白鼠肝细胞在体外原代培养实验时能显著提高对人体重型肝炎血清胆红素的代谢活性,在本实验中,我们进一步探讨经 PBS 诱导的小白鼠肝细胞在体内外时蛋白的合成能力,探讨预诱导后的肝细胞在生物人工肝潜在的应用价值。方法:12只成年雄性小白鼠,6个月龄,平均体重34克,随机分为预诱导组与对照组,预诱导组每日1次腹腔内注射 PBS 45mg/kg,共7次,对照组注射 NS,预诱导结束后两组实验对象分别进行如下实验项目比较其中的差异:末次给药的24h 后心内采血用贝克曼全自动生化仪分析总蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDLC)合成量;肝脏用胶原酶消化分离作细胞培养48h 后取培养液作同上四项生化分析;取培养24h 的肝细胞作 MTT 实验检测细胞增殖活性以及肝细胞体外培养存活期比较。相关数据用均数标准差表示,组间差异用 T 值检验。结果:实验组血清的 TP、BUN、CHOL、 HDLC 分别为:60.00±7.937,6.366±1.817,1.913±0.50,1.860±0.60;对照组血清分别为:48.666±6.67,5.633±0.839,1.936±0.43,1.513±0.721,其中 TP、BUN 和 HDLC 三项在实验组比对照组有一定提高,但统计学仅显示 TP 项有显著差异(t=2.678,P<0.5);原代肝细胞培养在实验组的培养液中 TP、BUN、CHOL、HDLC 分别为:10.0±1.0,3.10±2.029, 0.130±0.075,0.033±0.016;对照组培养液分别为:9.333±0.578,2.60±0.871,0.126 ±0.034,0.033±0.032,诱导组的 TP 值比对照组有所提高,但无统计学差异;MTT 实验检测实验组与对照组的光吸收值分别为0.263±0.004和0.251±0.010,未显示培养增殖活性的显著差异;培养的生存期限均不超过72h,细胞一般形态未见变化差异。结论:本实验结论提示 PBS 预诱导可提高成年小白鼠体内血清 TP、BUN 和 HDLC 的含量以及培养液中 TP 的含量,可见 PBS 的作用位点除滑面内质网外还应扩展至粗面内质网,进一步证实 PBS 在内质网的作用强势,使 PBS 的诱导物功能被拓展了它的新内涵与作用外延。因此,根据我们前期对体外肝细胞胆红素代谢活性的实验研究以及本次实验的系列结果,我们认为,预诱导后的肝细胞可能作为一种新型的肝细胞材料,在生物人工肝中具有潜在的使用价值(可能使有限的细胞数量在有限的单位时间内提高对重肝患者血浆胆红素代谢效能,并有利于提高患者血浆胶体渗透压)。本实验应进一步补充调查的是:在超大剂量的 PBS 作用下,是否对受体动物肝细胞产生药物性损害。更多还原