肝纤维化大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导类肝细胞的实验研究

【作者】 何文艳； 刘静； 刘树贤；

【机构】 河北医科大学石油临床医学院； 河北医科大学第一医院肝病中心实验室；

【摘要】 目的:观察实验性大鼠正常组、肝纤维化模型组骨髓间充质干细胞（MSCs） 体外诱导分化为类肝细胞的差异。方法:Wistar 大鼠16只,随机分为2组,每组8只,雌雄各半。分别为正常对照组、肝纤维化模型组。采用 CCl₄乳剂皮下注射建立肝纤维化模型, 留取大鼠肝脏标本,Masson 染色观察各组病理改变,确定造模成功。采用密度梯度离心法和贴壁法分离各组大鼠的 MSCs,经培养传代获得纯化的 MSCs。各组纯化的 MSCs 采用含 200mg/LFBS 的低糖 DMEM+20 μ g/LHGF+20 μ g/LFGF-4进行诱导培养。留取15、21、 27 d 细胞培养液进行白蛋白（Alb）、甲胎蛋白（AFP）检测;于27 d 收集细胞爬片,采用过碘酸希夫（PAS）实验进行糖原染色和免疫细胞化学染色检测 MSCs 中 CK-18、CK-19。结果:大鼠肝脏标本 Masson 染色显示:正常对照组肝组织表现正常,无肝纤维化:模型组肝脏广泛纤维组织增生,肝小叶失去正常结构。不同干预组于诱导15 d、21 d 和27 d,各 MSCs 诱导组 AFP 水平均高于 MSCs 非诱导组（P<0.01）,其中21 dAFP 水平最高;15 d 各 MSCs 诱导组与 MSCs 非诱导组白蛋白水平无统计学意义（P>0.05）;21 d、27 d 各 MSCs 诱导组白蛋白水平均高于 MSCs 非诱导组（P<0.01）,27 d 最高。27 d 各 MSCs 诱导组糖原染色阳性,免疫细胞化学染色 CK-18、CK-19均阳性,MSCs 非诱导组糖原染色、CK-18、CK-19 均阴性。从 AFP、白蛋白水平综合比较2组诱导效果发现两组无明显差别。结论:①HGF、 FGF-4可在体外诱导肝纤维化组、正常组大鼠的 MSCs 分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的类肝细胞;②自体 MSCs 可以作为治疗临床重症肝病的一种细胞来源。更多还原