芹菜素抑制人恶性黑素瘤细胞增殖及侵袭的作用机制研究

【作者】 韩晓东； 孟松树； 程伟； 孙喆； 倪静； 张云飞； 林景荣； 宋智琦；

【机构】 大连医科大学附属第一医院皮肤科；

【摘要】 目的:研究芹菜素对恶性黑素瘤体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制。方法:采用MTT法检测芹菜素对人恶性黑素瘤细胞株A375和C8161增殖的影响,体外迁移实验检测芹菜素对A375和C8161细胞迁移的影响,体外侵袭实验检测芹菜素对A375和C8161细胞侵袭的影响,扫描电镜观察芹菜素对A375和C8161细胞树突形态的影响,Annexin-V/PI法检测芹菜素对A375和C8161细胞凋亡的影响,PI单染法检测芹菜素对A375和C8161细胞周期的影响,Western Blot检测芹菜素对A375和C8161细胞凋亡及ERK信号通路相关蛋白的影响。结果:MTT结果显示芹菜素在10～40μg/ml浓度范围内对A375和C8161细胞抑制作用呈量效关系,在0-48h呈时效关系,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。其24h的IC50均为25μg/ml。体外迁移试验证实,10、20、25μg/ml芹菜素作用于A375和C8161细胞24h可明显抑制细胞迁移(P<0.001)。体外侵袭实验证实,10、20、25μg/ml芹菜素作用于A375和C8161细胞72h,细胞侵袭数量显著少于对照组(P<0.001)。扫描电镜结果示经25μg/ml芹菜素作用于后,A375和C8161细胞树突均变细长,A375细胞树突长度为25μg/ml芹菜素组(23.3±2.62)μm,与DMSO对照组(12.38±2.27)μm相比有统计学意义(P<0.001);C8161细胞树突长度为25μg/ml芹菜素组(16.5±1.62)μm,与DMSO对照组(9.36±2.51)μm相比有统计学意义(P<0.001)。AnnexinV/PI双染法证实10、25μg/ml芹菜素处理24h,A375细胞凋亡率分别为(3.30±0.82)%、(10.00±0.60)%,与DMSO对照组(0.40±0.07)%、(4.00±0.70)%相比差异均有统计学意义(P<0.01);C8161细胞凋亡率分别为(13.10±1.45)%、(25.77±2.40)%,与DMSO对照组(7.27±1.31)%相比差异有统计学意义(P<0.01)。PI单染法证实,25μg/ml芹菜素作用于A375和C8161细胞24h后,与对照组细胞周期均阻滞于G2/M期,比例分别为(48.7±3.04)%、(31.10±1.90)%,与对照组(21.30±0.75)%、(25.07±2.16)%相比均有显著差异(P<0.01)。Western Blot结果发现经25μg/ml芹菜素作用于后,A375和C8161细胞凋亡相关蛋白Cleaved PARP和Cleaved Caspase-3表达均增加,ERK信号通路均被活化。结论:芹菜素可抑制人恶性黑素瘤细胞增殖、迁移、侵袭、诱导细胞凋亡及周期阻滞,其机制可能与调节ERK信号通路相关蛋白的表达有关。更多还原