原癌基因c-myc调控Aurora B拮抗剂与顺铂合用药效学的研究

【作者】 曹汉迪； 应美丹； 杨波； 何俏军；

【机构】 浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所；

【摘要】 [目的]顺铂作为细胞毒类化疗药物,一直被广泛应用于肿瘤的治疗,但顺铂在临床应用中也存在一些问题,如病人对其化疗敏感性低、容易产生耐药等。因此寻找可以增敏顺铂疗效的联合用药方案,并寻找相应的生物标志物,已有迫切的临床需求。AZD1152作为Aurora B的选择性拮抗剂,可以诱导细胞产生多倍体,且有研究表明,Aurora B拮抗剂的药效与原癌基因c-myc的表达水平呈正相关。本实验旨在研究AZD1152和顺铂联合应用的药效,并探讨c-myc在其中的作用,为顺铂的临床治疗提供新的思路。[方法]用SRB法测定细胞的增殖曲线;PI单染结合流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况;DAPI染色观察细胞核形态的变化;Westernblot检测凋亡相关蛋白及目标靶蛋白的变化、过表达及siRNA干扰技术研究目标基因在特定条件下的生物学功能。[结果]①顺铂在3株卵巢癌细胞株OVCAR8、SKOV3、A2780上的IC₅₀与细胞株的c-myc水平呈正相关性。在c-myc基础表达水平低的SKOV3细胞中过表达c-myc及在c-myc基础表达水平的OVCAR8敲除c-myc以后检测顺铂的IC₅₀,发现c-myc水平的改变对顺铂的增殖抑制作用并没有影响。②在3株卵巢癌细胞中AZD1152的IC₅₀和其诱导多倍体的能力都与c-myc表达水平呈负相关。并且,在SKOV3过表达c-myc及在OVCAR8敲除c-myc,均发现c-myc可以协同AZD1152的增殖抑制效果。③利用SRB法检测IC₅₀,将AZD1152与顺铂同时联合应用,发现两者具有一定的合用药效;进一步将AZD1152预先作用1d后再给予顺铂,两者合用药效明显增强;并且当AZD1152预先作用1d后撤去,再给予顺铂,两药之间合用药效依然非常明显,且优于同时作用。通过流式细胞术和Western blot检测凋亡,也发现2种序贯给药方案的合用药效明显强于同时给药。④在OVCAR8细胞敲除c-myc后,AZD1152与顺铂序贯给药的合用效果明显弱于未敲除组:在SKOV3细胞过表达c-myc后,AZD1152与顺铂序贯给药的合用效果较SKOV3正常组有一定程度的增强,提示c-myc的表达水平与AZD1152和顺铂的联合应用具有相关性。⑤选取c-myc高表达且顺铂作为一线用药的其他肿瘤细胞株（如KHOS、U2OS、NCI-H1299、5637、PC3）研究AZD1152和顺铂的联合应用,结果发现AZD1152与顺铂的序贯给药均有良好的合用效果。[结论]在Aurora B拮抗剂AZD1152诱导肿瘤细胞形成多倍体的情况下,可以增敏细胞毒类化疗药顺铂的药效,并且c-myc的表达水平与Aurora B拮抗剂诱导多倍体的能力及AZD1152与顺铂序贯给药的药效均呈正相关,提示c-myc可以作为AZD1152与顺铂序贯给药的生物标志物。本研究对于提高顺铂的临床应用及其肿瘤的个体化治疗具有重要意义。更多还原