邻苯二甲酸二乙基己基酯对新生大鼠肺发育的影响

【作者】 应燕芬； 陈尚勤； 胡小娅； 林锦； 林振浪；

【机构】 温州医学院附属第二医院育英儿童医院新生儿科；

【摘要】 目的 1.探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对新生大鼠肺形态发育的影响。2.探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子β-1(TGFβ-1)是否参与DEHP影响肺发育的过程。方法 1.实验动物和分组:Sprague-Dawley新生大鼠120只,出生体重在5.0-8.0g。出生后第1天开始给对照组腹腔注射玉米油0.2ml/d,实验组分为低剂量组(DEHP 10mg/kg/d)、中剂量组(DEHP 100mg/kg/d)和高剂量组(DEHP 750mg/kg/d)。直至第14天和第21天处大鼠,获取肺组织标本,并进行检测。2.检测指标:记录新生鼠每日体重。取生后第14天、21天大鼠右肺中叶,常规苏木素伊红(HE)染色,在光镜下观察肺组织病理学改变并进行形态学分析,计算肺间质比例。免疫组化PV二步法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子β-1(TGFβ-1)的表达。取新鲜肺组织用实时定量PCR(Real-time PCR)方法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子β-1(TGFβ-1)的mRNA的表达,两者进行相互印证。结果 1.各组体重比较第14天:低剂量组和对照组比较,无统计学意义(P>0.05),低剂量组和中剂量比较有显著性差异(P<0.05),和高剂量组相比差异更明显(P<0.01);中、高剂量组之间比较有统计学意义(P<0.05)。剂量越高,体重减轻越明显。第21天:低剂量组和对照组比较,无统计学意义(P>0.05),中、高剂量组和对照组相比,有显著性差异(P<0.01),各实验组之间两两比较有统计学意义(P<0.01或P<0.05),剂量越高体重下降越明显。2.肺形态学分析第14天时,低剂量组与对照组在肺形态学方面比较无显著性差异(P>0.05)。但在中、高剂量组则显示肺间隔增厚、肺间质细胞增多,肺泡数目减少,肺间质比例增大(P<0.05),提示中、高剂量组的大鼠肺泡发育受抑制。第21天时各实验组和对照组肺间质比例比较均没有统计学差异(P>0.05)。3.基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子β-1(TGFβ-1)的mRNA及蛋白的表达第14天各个实验组的MMP-9、TGFβ-1 mRNA及蛋白的表达和对照组比较均有统计学意义(3组P值均<0.01),剂量越高,增加越明显;TIMP-1 mRNA及蛋白的表达和对照组比较均有统计学意义(3组P值均<0.01),剂量越高,下降越明显。第21天各个实验组的MMP-9、TGFβ-1 mRNA及蛋白的表达和对照组比较均有统计学意义(3组P值均<0.01),剂量越高,下降越明显;TIMP-1 mRNA及蛋白的表达和对照组比较均有统计学意义(3组P值均<0.01),剂量越高,增加越明显。结论 1.新生大鼠中、高剂量组DEHP可抑制大鼠体重的增长,暴露量越大,抑制作用越明显。2.中、高剂量DEHP暴露可抑制第14天大鼠肺泡发育,在第21天可以逆转。3.新生大鼠DEHP暴露后第14天时MMP-9、TGFβ-1 mRNA及蛋白的表达均升高,而第21天时其表达均下降,且呈剂量依赖性;第14天时TIMP-1 mRNA及蛋白的表达下降,而第21天时其表达升高,亦呈剂量依赖性。DEHP可能通过MMP-9、TIMP-1、TGFβ-1的变化而影响新生大鼠的肺发育。更多还原