小鼠肺微血管内皮细胞的原代培养、鉴定及其体外血管形成功能的研究

【作者】 曹婕； 高润娣； 姚一楠； 王晴； 陆国华； 李和权； 周建英；

【机构】 浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科；

【摘要】 目的为了建立一种简单有效的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)的原代培养方法,鉴定PMVECs表型,并对其体外血管形成功能进行研究。方法选取出生1周内的C57BL/6小鼠的肺组织边缘,采用组织贴块法原代培养PMVECs。通过形态学观察、免疫细胞化学鉴定后,以2×104细胞/孔的密度接种于铺有基质胶的96孔细胞板,在倒置显微镜下观察(1次/2h)其24h体外血管形成过程。结果镜下可见原代培养的PMVECs呈梭形或多角形,单层融合呈铺路石样,细胞抗Ⅷ因子相关抗原(ⅧF-Ag)染色阳性,免疫荧光显微镜下可见大部分细胞摄取Di-Ac-LDL,胞质呈现红色荧光,细胞表面与FITC-BSI结合,呈现黄绿色荧光,PMVECs纯度可达90%以上。接种在96孔板上的细胞于4-6h后出现明显管腔结构,并于接种后12h达到管腔形成高峰。结论组织贴块法培养原代PMVECs操作简单、细胞得率和纯度高,并可在体外成功建立血管形成模型,为进一步的疾病研究提供了体外细胞模型。更多还原