MSM HIV感染者特异性T细胞TCR α CDR3谱序初探

【作者】 李志峰； 冯连贵； 王豫林； 曾艺； 张宏军； 冷文杰； 陈亮； 李琴；

【机构】 重庆市疾病预防控制中心； 渝中区疾病预防控制中心； 永川区疾病预防控制中心；

【摘要】 目的 TCR CDR3谱型能很好地反映感染、自身免疫、肿瘤等T细胞的应答和耐受情况,目前已经在HBV、HCV、EBV等病毒感染性疾病中找到特异的TCRβ链CDR3序列,但目前对TCRα链与疾病研究的报道较少,而且目前国内外没有从TCR CDR3对这群T细胞的TCR分子特征和应用研究的报道。本文利用实验室已建立的"荧光定量PCR溶解曲线法监测HIV感染者TCRCDR3谱系漂移技术",来监测分析MSM HIV感染者α链CDR3谱系的特点,发现HIV特异TCR TRAV家族,初步探讨TCRα链CDR3谱系的变化及这种变化在AIDS疾病过程中的可能意义。方法设计合成TCR AV基因家族上游引物34条,TCRAC下游引物1条,对照TRAC上游引物一条。研究对象均来自于重庆市各区县汉族人,相互之间均无血缘关系,排除有家族遗传病史、免疫性疾病、病毒性肝炎和近期患其他感染型疾病,年龄在18～40岁的年轻男性人群。其中HIV感染者共19例,平均年龄32岁;对照正常健康男性人群22名,平均年龄29岁。分离淋巴细胞、总RNA提取和cDNA合成(用OligdT作引物)。PCR反应体积20μl,反应条件:①94℃3 min;94℃30 s 55℃30 s 72℃50 s 45 cycles;72℃10 min 1 cycles;②熔解曲线分析:75℃～95℃以0.2℃/s读取荧光值,100 cycle。本研究TCR熔解曲线法的CDR3谱型分布和表达频率的峰图上,分别计数TRAV1至TRAV32各家族的"单峰"(单克隆)、"寡峰"(多克隆)家族和"无峰"(表达缺失)家族,进行统计学分析,以期发现MSM HIV感染者特异性TRAV家族异常或分布。结果 MSM HIV感染者的TAV4.2,TARV10和TRAV23的单(寡)性表达频率要高于健康男性人群(P<0.05),MSM HIV感染者的TRAV亚家族的缺失率(1.70%)虽然高于对照男性健康人群的TRAV亚家族的缺失率(0.80%),但二者差异没有统计学意义。结论在国内首次利用"荧光定量PCR溶解曲线法"监测HIV感染者TCRα链CDR3漂移变化,发现MSMHIV感染者的TCR AV家族存在单(寡)性增生和缺失现象,非正态分布现象增加,多样性减少。更多还原