Cpn0186的基因克隆、表达及其免疫原性分析

【作者】 程健君； 贾天军； 贾晓晖； 齐校勇； 刘雪晴； 蔡念光；

【机构】 河北北方学院医学检验综合实验室；

【摘要】 目的原核表达肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0186,并分析该蛋白在肺炎衣原体感染人群中的免疫原性,为进一步研究Cpn01 86生物学特性及其可能的应用提供依据。方法①按照Gen Bank提供的肺炎衣原体AR39株Cpn0186基因序列设计相应引物并应用PCR技术扩增出Cpn0186基因,纯化后行双酶切并与经相同限制性内切酶处理的pGEX-6p2质粒由T4连接酶介导连接构建pGEX-6p2-Cpn0186原核表达载体,双酶切及序列测定等方法鉴定重组质粒是否构建成功;②确定构建成功后用热休克法介导重组质粒转化感受态大肠杆菌XL1-blue,并在其中诱导表达目的蛋白Cpn0186,SDS-PAGE验证目的蛋白是否成功表达;③用细菌裂解液包被空酶标板,应用间接ELISA法测定肺炎衣原体感染人群血清中CPn0186抗体水平,所取血清标本预先用pGEX-6P2空质粒转化诱导后的细菌裂解液进行吸附,以去除试验中无关蛋白对结果的影响,分析Cpn0186的免疫原性。结果 PCR方法扩增获得Cpn0186基因,序列测定证实所获得序列与Gen Bank登录的CpnAR39株Cpn0186基因一致;经双酶切pGEX-6p2-Cpn0186重组质粒获得2个线性DNA片段,其分子量分别与酶切后目的片段和载体pGEX-6P2相等;蛋白电泳结果显示在68.5 kD处有条带出现,与预期结果一致;感染人群血清中Cpn0186抗体水平明显高于对照人群,具有统计学意义。结论成功构建了pGEX-6p2-Cpn0186原核表达载体,蛋白电泳表明该质粒能在大肠杆菌中表达目的蛋白,通过检测显示感染人群血清中抗体水平高于对照组,表明该蛋白具有较高的免疫原性。该发现为进一步探讨包涵体膜蛋白Cpn0186能否充当抗衣原体感染的候选疫苗奠定基础,也为进一步了解Cpn0186的生物学特性奠定了基础。更多还原