液相芯片技术在耐多药结核病检测中的应用

【作者】 韩明明； 凌虹； 姜春来；

【机构】 吉林大学生命科学学院； 哈尔滨医科大学；

【摘要】 目的当结核病至少对两种一线药物异烟肼(INH)和利福平(RIF)同时耐药时,被称为耐多药结核病(MDRTB)。在我国,结核病耐药性检测最主要的手段为药物敏感性试验(DST),该方法需要2～3个月才能确诊,这将延误治疗,导致抗性菌株进一步地传播,同时错误的治疗方法还会加剧耐药性结核病的恶化。目前有一些快速检测结核病耐药性的方法,但是有的准确度不高,有的操作复杂或价格昂贵,难以在发展中国家推广。所以本研究的目的在于:针对我国国情,以液相芯片为基础,开发出一种快速、准确、简单且价格相对较低的检测方法。方法大量研究表明基因点突变是导致结核分枝杆菌产生耐药性的根本原因。与MDR-TB最为相关的突变为:①katG315(AGC→ACC或AAC,INH耐药,突变频率为50%～90%);②inhA-15(C★,INH耐药,突变频率为6%～30%);③rpoB531(TCG→TTG或TGG)及rpoB526(CAC→GAC或TAC),两者均为RIF耐药,突变频率分别为75%左右和10%左右。基于以上理论,此研究以多重PCR和液相芯片法(L0uminex xTAG)为基础,对此4个位点的11个野生型/突变型等位基因进行检测,以诊断结核病的耐药性。设计了3组多重PCR引物,11条ASPE(Allele Specific Primer Extension,等位基因特异性引物延伸反应)引物,以153例临床结核分枝杆菌基因组为样本,使用液相芯片技术对上述耐药位点的11种野生型/突变型等位基因进行检测。并使用测序方法对该方法结果进行评价,同时将两者在检测时间和成本方面进行对比。结果 153例临床样本检测结果显示,液相芯片法能够有效地区分出同一位点的不同基因型,阳性结果为阴性结果的5倍以上,各位点检测无相互干扰。该方法表现了与测序法良好的吻合度(katG315 100%;rpoB52699.34%;rpoB531 98.67%;inhA-15 100%),并且在混合感染的检测中更具有优势。同时与测序法相比,该方法操作简单,速度快,能够在一个工作日内完成数十甚至上百个样本的检测,每个样本检测成本约为70元,新增1个检测位点需增加约3.7元,价格低廉。结论液相芯片法是一种快速、准确且成本低廉的结核病耐药性检测方法,在结核病早期诊断和防治过程中具有较高的应用价值,适合在发展中国家推广。更多还原