不同体积分数氧刺激早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞后对WNT信号通路表达的影响

【作者】 李祝； 方芳； 许峰；

【机构】 重庆医科大学附属儿童医院PICU；

【摘要】 目的探讨不同体积分数氧状态下,体外培养早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡepithelial cell,AECⅡ)的生长变化以及对WNT信号通路表达的影响。方法原代培养早产鼠AECⅡ并用电镜鉴定;建立95%O2、40%O2和空气3种氧化损伤性细胞模型,各自暴露12H、24H和48H;四甲基偶氮唑盐反应比色法(MTT法)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(reactiveosygenspecies,ROS)浓度;RT-PCR检测WNT5a基因表达;Western-blot法检测细胞核中非磷酸化β-catenin蛋白的数量变化。结果与空气组相比,氧体积分数0.4组在12H、24H存活率和凋亡率均无统计学差异,但48H后出现统计学差异,ROS在12H升高不明显,超过24H有统计学差异;氧体积分数>0.95组每组均和空气组有统计学差异。WNT信号通路表达在12H以氧体积分数>0.95组明显;24H空气组和氧体积分数0.4组升高,以氧体积分数0.4组最显著,氧体积分数>0.95组表达下降;48H空气组达到高峰,其余两组下降。结论随着氧化应激时间的延长,即使较低浓度的氧刺激(40%)在超过48H以后也会出现相应的氧化损伤;氧体积分数越高WNT信号通路激活越快,但随着氧化应激时间的延长,WNT信号通路表达下降也越迅速。更多还原