赭曲霉毒素A诱导体外培养人胃粘膜上皮细胞G2期阻滞

【作者】 崔晋峰； 张祥宏； 邢凌霄； 王俊灵； 严霞；

【机构】 河北医科大学病理研究室；

【摘要】 目的探讨赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)对体外培养的人永生化胃粘膜上皮细胞GES-1细胞凋亡和周期的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞定量检测(FCM)、吉姆萨(Giemsa)染色、激光共聚焦显微镜、蛋白质免疫印迹(Western印迹)、免疫共沉淀以及反转录聚合酶联反应(RT-PCR)方法,研究不同浓度(5、10、20μmol/L)OTA处理24h后,GES-1细胞的存活率、细胞凋亡率、周期分布以及caspase-3、Cdc25C、Cdc2、cyclinB1表达的变化情况。结果MTT法检测结果显示,在0.1～100μmol/L浓度范围内,随着OTA浓度的升高明显抑制GES-1细胞的增殖(r=-0.916,P<0.01)。FCM和Western印迹结果显示,OTA可以通过激活caspase-3诱导GES-1细胞发生凋亡。FCM、吉姆萨染色和激光共聚焦检测结果显示,给予10和20μmol/L OTA处理24 h可诱导胃粘膜上皮细胞周期发生G2期阻滞。Western印迹分析结果显示,在5～20μmol/L浓度范围内,OTA可以剂量依赖性地下调Cdc25C、磷酸型Cdc25C、Cdc2、磷酸型Cdc2和cyclinB1在蛋白质水平上的表达(Cdc25C:r=-0.911,P<0.01;pCdc25C:r=-0.901,P<0.01;Cdc2:r=-0.831,P<0.01;pCdc2:r=-0.876,P<0.01;cyclinB1:r=-0.852,P<0.01)。免疫共沉淀结果显示,OTA处理后cyclinB1-Cdc2复合物减少。RT-PCR检测在mRNA水平进一步证实了OTA对Cdc25C、Cdc2和cyclinB1表达的影响。结论OTA可诱导体外培养人永生化胃粘膜上皮(GES-1)细胞凋亡,并诱导细胞发生G2期阻滞。Caspase-3的激活和Cdc25C、Cdc2、cyclinB1表达下降可能是OTA诱导凋亡和周期分布变化的重要机制。更多还原