高表达Legumain(半胱氨酸蛋白酶)拮抗由TNF-a介导的细胞凋亡

【作者】 吴文苑； 段朝晖； 谢亚琴； 余涟；

【机构】 深圳市人民医院检验科； 中山大学附属第二医院检验科；

【摘要】 目的探讨Legumain(半胱氨酸蛋白酶)对肿瘤坏死因子-a(Tumor necrosis factor a,TNF-α)和放线菌酮(Cycloheximide,CHX)协同诱导的细胞凋亡的抑制作用,为进一步研究Legumain在肿瘤细胞生长增殖的分子机制以及相关的肿瘤治疗提供实验基础和理论依据。方法采用Western Blot和水解多肽发色底物法分别测定人胚胎肾细胞293细胞株和小鼠成纤维细胞L929细胞株中的Legumain表达量,细胞增殖实验(MTT法)检测Legumain对由TNF-α和CHX共同介导的细胞增殖抑制的拮抗作用,激光共聚焦显微镜和流式细胞技术观察Legumain的抑制细胞凋亡效果。结果实验组中的293+Legumain细胞和采用Legumain抑制剂(Asparagingly endopeptidase inhibi tor,AEPI)预先处理的L929细胞对一定浓度范围的TNF-α和CHX共同介导的细胞增殖抑制有显著的拮抗作用(P<0.001和P<0.05);激光共聚焦显微镜观察,Annexin V-PI双染法结果表明实验组的293+Legumain细胞未发生细胞凋亡现象;流式细胞技术,JC-1染色法测细胞线粒体膜电位结果表明实验组的293+legumain细胞的凋亡百分比明显低于对照组(P<0.001)。结论:Legumain具有拮抗由TNF-α和CHX协同诱导的细胞凋亡作用。更多还原