原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞FOXP3mRNA表达水平的研究

【作者】 王红梅； 李凤莲； 张洋； 张逢春； 赵冠飞； 冯雪； 包树萌； 胡朝军； 张蜀澜； 李永哲； 张奉春；

【机构】 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科；

【摘要】 背景原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种病因未明以肝内胆管的慢性炎症和进行性破坏,血清中出现抗线粒体抗体（AMA）为特征,最终导致肝硬化和器官衰竭的自身免疫性肝病。其主要病理表现为肝内小胆管进行性破坏伴门脉炎症性改变,最终导致肝纤维化及肝硬化;临床表现为慢性梗阻性黄疸与肝脾肿大,晚期可出现肝功能衰竭与门脉高压等征象。近几年我国PBC的发病率逐年增加。同时,越来越多的调节因子被认为与PBC的发生有关。FOXP3就是新近发现的一个转录因子,属于foxhead家族成员,组成性表达于机体的CD₄⁺CD₂₅⁺T调节细胞,介导C₄⁺CD₂₅⁺Treg细胞在胸腺的发育、外周表达及功能维持。研究发现FOXP3基因突变或敲除的小鼠,其体内CD₄⁺CD₂₅⁺Treg细胞数量下降,调节功能缺陷,可诱发严重的自身免疫反应,因此,FOXP3对机体免疫自稳起着决定性作用。目的探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA表达及其与疾病活动性的关系。方法基于Taqman探针技术,制备阳性克隆,绘出标准曲线,以β-actin为内参照,建立逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）方法,在ABI 7300 Real time PCR system型检测仪上检测60例PBC患者（活动期35例、缓解期25例）、和健康体检者30例（正常对照组）外周血单个核细胞（PBMCs）中FOXP3 mRNA的表达水平和含量。以△Ct=Ct（待测基因）-Ct（内参基因）来比较基因表达水平的高低。结果PBC患者活动期FOXP3 mRNA的平均拷贝数低于正常对照组[（5.59±5.53）×10⁶vs（2.33±2.86）×10⁷)]差异有显著性（P<0.05）;缓解期FOXP3 mRNA的平均拷贝数与正常人差异无显著性[（2.18±4.37）×10⁷vs（2.33±2.86）×10⁷,P>0.05]活动期FOXP3 mRNA的平均拷贝数低于缓解期FOXP3 mRNA的平均拷贝数[（5.59±5.53）×10⁶vs（2.18±4.37）×10⁷]差异有显著性（P<0.05）。结论结果显示PBC患者FOXP3 mRNA表达水平显著低于正常人和疾病稳定期,FOXP3的表达与PBC的发生发展存在一定关联性,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关。更多还原