靶向dickkopf-1分子的siRNA对类风湿关节炎纤维样滑膜细胞抑制作用的研究

【作者】 王世瑶； 刘燕鹰； 穆荣； 栗占国；

【机构】 北京大学人民医院风湿免疫科；

【摘要】 目的观察靶向dickkopf-1(DKK1)分子的siRNA对类风湿性关节炎(RA)纤维样滑膜细胞(FLS)生物活性的影响。方法化学法合成6条靶向DKK1分子的siRNA,经脂质体转染RA患者FLS细胞,通过Real-Time PCR及ELISA法检测DKK-1的表达水平分子,筛选出作用效果较好的siRNA。再利用ELISA法检测siRNA作用于FLS后,细胞培养上清中IL-6、IL-8、MMP2及MMP9水平变化。~3H掺入法检测siRNA分子对细胞增殖的影响。应用CellInvasion Assay Kit(Cell Biolabs)观察细胞侵蚀能力的变化。上述实验同时选取靶向无关序列的siRNA作为对照组,并应用DKK1的单克隆抗体作为阳性对照。结果①靶向DKK1分子的siRNA作用于FLS后,DKK1 mRNA表达及细胞上清中DKK1水平明显低于对照组,P值<0.001。②抑制DKK-1分子的表达,可明显下调FLS的IL-6、IL-8、MMP2及MMP9分泌水平,与对照组相比P<0.05。③同时发现靶向DKK1分子的siRNA可抑制FLS的增殖,P值<0.001。④抑制FLS DKK1分子的表达还可降低细胞的侵蚀能力。结论从细胞因子分泌、增殖及侵蚀三方面证明靶向DKK1分子的siRNA对FLS抑制作用。更多还原