百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备及ELISA定量检测方法的建立

【作者】 彭祥兵； 陈雯； 詹骞； 项美娟； 张爱华； 杨晓明；

【机构】 武汉生物制品研究所；

【摘要】 目的:制备百日咳丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA法用于FHA含量的检测。方法:采用杂交瘤技术制备FHA McAbs,并对其进行鉴定;优化ELISA反应系统条件,建立FHA双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其精密性及准确性进行验证。结果:获得4株稳定分泌抗FHA杂交瘤细胞株,抗体亚型分别为IgG1和IgG2b,抗体腹水ELISA效价达1:10~5～1:10~5之间,均能与FHA发生特异反应,而与百日咳毒素和流感病毒血凝索未发生交叉反应;建立的ELISA法的线性检测范围在1.56～100 ng/mL之间,板内变异系数为2.54%～8.13%,板间变异系数为3.42%～5.85%;FHA的高、中、低浓度的回收率分别为94.73%、108.67%和116.37%。结论:已成功获得稳定分泌抗FHA的杂交瘤细胞株,并建立了一种特异性、精密性和准确性均较好的的定量检测FHA的ELISA法,可用于无细胞百日咳疫苗生产中间产品FHA的定量检测。更多还原