表达细粒棘球绦虫成虫不同发育阶段的基因家族

【作者】 张文宝； 李军； 由弘； 张壮志； 古努尔·吐尔逊； AlexLoukasa； DonaldP.McManusa；

【机构】 Molecular Parasitology Laboratory, Australian Centre for International and Tropical Health and Nutrition,The Queenshrnd Institute of Medical Research, The University of Queensland； Veterinary Research Institute, Xinj iang Academy of Animal Science, Urumqi； Molecular Parasitology Laboratory, Australian Centre for International and Tropical Health and Nutrition, The Queenshrnd Institute of Medical Research, The University of Queensland；

【摘要】 在细粒棘球绦虫成虫发育阶段不成熟虫体和成熟虫体mRNA表达不同,利用不同的真实时间展示PCR法筛选这些差异mRNA,反转录成cDNA片段经分离,克隆和测序,确定有28个不同。对来自于不成熟虫体和成熟虫体的mRNA片段进行标记。6个cDNA片段(编码为:egM12,egM13,egM22,egM26,egM30和egM34)与成熟虫体进行Northern杂交,呈特异性阳性反应。利用RT-PCR肯定了egM12,egM13和egM34的阶段特异性。EgM13和egM30探针在不成熟虫体、成熟虫体、原头蚴和六钩蚴的RNA检测中,除成熟虫体外,其它阶段虫体均存在于mRNA中。这似乎暗示它们涉及虫卵发育过程。用标记的探针去筛选成熟虫体cDNA文库,挑选出99个阳性克隆。对筛选出的与成熟虫体mRNA呈特异性反应的阳性克隆做线性排列,表明属同一基因家族。通过排序推断氨基酸序列,3个基本一致的cDNA片段(egM4,egM9,egM123)确定都富含半胱氨酸,具有相同的24个氨基酸序列,重复排列4-6遍。这些重复区域天然的结合位点,决定了α螺旋,形成了控制阳性和阴性的互换区。每种cDNA片段的显著性功能尚未知晓;同样序列极为相似的基因,功能是否相近也鲜未人知。然而,通过egM4和egM123重组的多肽识别细粒棘球绦虫感染犬的混合血清中抗体。因此,推断他们可能具有终末宿主血清学诊断价值。更多还原