弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析

【作者】 雷明军； 吴少庭； 戴五星； 潘晖榕； 林绮萍； 温见翔； 黄达娜； 高世同； 张仁利；

【机构】 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系； 深圳市疾病预防控制中心分子生物室； 华南农业大学动物医学系； 广东医学院微生物学教研室；

【摘要】 目的构建原核重组表达质粒p ET23a2SAG2,并在大肠埃希菌中实现高效表达,以及检测表达产物的抗原性。方法 PCR扩增SAG2编码基因目的片段,琼脂糖凝胶电泳回收纯化,克隆至pMD182T载体,转化大肠埃希菌DH5α。测序后亚克隆至表达质粒载体p ET23a,构建重组表达质粒p ET23a2SAG2,转化大肠埃希菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基2β2D2硫代半乳糖苷诱导表达。十二烷基硫酸钠2聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS2PAGE)与免疫印迹分析表达产物。结果 PCR扩增出约500 bp的SAG2编码基因目的片段,与预期片段大小相符,经测序鉴定无基因突变;所构建的pET23a2SAG2重组表达质粒阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;含有p ET23a2SAG2重组质粒的大肠埃希菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS2PAGE显示表达产物约Mr 19 000;免疫印迹结果表明表达产物具有良好的抗原性。结论成功构建了p ET23a2SAG2表达质粒,实现了全长成熟SAG2蛋白在大肠埃希菌中的高效表达;表达产物具有良好的抗原性。更多还原