益气化瘀方减轻HIF-1α条件性基因敲除小鼠椎间盘退变的研究

【作者】 王晶； 董芳芳； 李晓锋； 舒冰； 施杞； 王拥军； 周重建；

【机构】 上海中医药大学脊柱病研究所； 上海中医药大学附属龙华医院；

【摘要】 目的:观察HIF-1α条件性基因敲除(HIF-1αcKO)小鼠椎间盘软骨退变情况,以及中药复方益气化瘀方对HIF-1αcKO小鼠椎间盘软骨的作用。方法:繁殖Co12-CreERT2;HIF-1αfx/fx小鼠及同窝Cre阴性对照小鼠,通过腹腔注射Tamoxifen,敲除软骨细胞中HIF-1α,得到HIF-1αcKO小鼠及对照。①分别处死2.5月龄和4.5月龄HIF-1αcKO小鼠及其同窝对照小鼠,取L4-6腰椎,分别进行藏红固绿染色、苏木精-伊红/(HE)染色及相关指标免疫组化染色及分析,观察HIF-1αcKO小鼠椎间盘的表型。②将0.5月龄HIF-1αcKO小鼠随机分为生理盐水组和益气化瘀方组,灌胃给药2月后,取各组小鼠的L4-6椎间盘,分别进行藏红固绿、HE及免疫组化相关指标染色及分析,观察益气化瘀方对HIF-1α基因敲除小鼠椎间盘软骨的影响。结果:①结果显示HIF-1α-/-小鼠2.5月龄组椎间盘软骨组织出现破损和骨化,细胞分布不均匀,软骨细胞减少。HIF-1α-/-小鼠4.5月龄组椎间盘软骨损伤更加严重。HIF-1α-/-小鼠2.5月龄组椎间盘软骨中ColⅡ和Sox9表达降低,Col X、MMP13表达增加。HIF-1α-/-小鼠4.5月龄组ColⅡ蛋白与Sox9表达进一步降低,ColX、MMP13表达进一步上升。②与生理盐水组比较,益气化瘀方干预后HE染色和藏红固绿染色显示软骨骨化和缺损减轻,软骨细胞数目较多,分布较均匀。与生理盐水组比较,益气化瘀方组椎间盘软骨中ColⅡ和Sox9的表达升高,Col X、MMP13表达减少。结论:HIF-1α基因敲除小鼠出现了椎间盘软骨退变,并且这种退变随着小鼠增龄而加重;益气化瘀方可以减轻HIF-1α基因敲除小鼠的椎间盘软骨退变。更多还原