睾丸Leydig干细胞分离、纯化及鉴定的体外研究

【作者】 肖斌； 邢新； 王晓云； 周英晋； 毕宏达； 朱吉； 张敬德；

【机构】 第二军医大学附属长海医院整形外科；

【摘要】 目的改进Leydig干细胞的分离及纯化方法,观察其生物学特性并进行鉴定。方法通过胶原酶消化、差速贴壁法及双抗体免疫磁珠分选法由7天大鼠睾丸内获得Leydig干细胞。以条件培养液对其进行培养,采用CCK法测定增殖能力。通过PDGFRα,LIFR,及3β-HSD免疫组织化学染色鉴定Leydig干细胞。经定向诱导分分化后检测Leydig细胞的睾酮分泌能力。结果每个睾丸约可获得83000个干细胞,经免疫组织化学染色分析,PDGFRα阳性率为98.0±0.8%。在条件培养液中培养的SICs增殖明显,在一个月内能稳定维持其干性而未向Leydig细胞系分化。免疫组织化学染色结果表明PDGFRα、LIFR阳性,3β-HSD为阴性。Leydig干细胞在含有T3和HCG培养液中培养后,于第5天即可测到睾酮分泌,分化后的细胞3β-HSD(+)。结论由差速贴壁法及双抗体免疫磁珠分选法能获得纯化的PDGFRα(+)/LHR(-)阴性细胞,这些细胞符合SLCs所必需具有的特征。采用该方法获取SLCs,操作简便,细胞损伤小并且获取纯度高。更多还原