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Tie2基因的RNAi慢病毒载体的构建及其干预恶性黑色素瘤细胞的体外研究
【作者】 刘照亮； 王彪； 郭国祥； 单秀英； 王美水； 庄福连； 病理科； 张声；
【机构】 福建医科大学附属第一医院整形外科；
【摘要】 目的:构建并鉴定携带Tie2-SiRNA慢病毒载体,观察其对恶性黑色素瘤细胞的干扰作用,为将来进一步进行抑制肿瘤生成的动物实验研究奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法:将pSilencer 1.0-U6-Tie2-siRNA重组质粒经XbaⅠ酶切电泳鉴定后,与经XbaⅠ酶切电泳鉴定的pNL-EGFP载体连接,产生pNL-EGFP-U6-Tie2慢病毒转移质粒,电泳筛选阳性克隆,测序鉴定。用pNL-EGFP-U6-Tie2慢病毒转移质粒,pVSVG包膜质粒和pHelper包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒。收集病毒上清,测定病毒滴度。将收集的病毒上清感染恶性黑色素瘤细胞,通过实时定量RT-PCR测定抑制Tie2基因表达的效果。结果:酶切电泳与测序鉴定证实成功构建了Tie2-SiRNA慢病毒载体,293T细胞测定病毒原液滴度为8.8x103/ml。慢病毒载体感染恶性黑色素瘤细胞,抑制了恶性黑色素瘤细胞中Tie2基因的表达。结论:成功构建了Tie2-SiRNA慢病毒载体。体外研究显示其能抑制恶性黑色素瘤细胞的Tie2 mRNA的表达,为下-步进行抑制肿瘤血管生成的动物实验研究奠定了基础。
- 【会议录名称】 中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集
- 【会议名称】中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议
- 【会议时间】2011-08-17
- 【会议地点】中国新疆乌鲁木齐
- 【分类号】R739.5
- 【主办单位】中华医学会整形外科学分会、解放军整形外科学专业委员会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会