黄芪、丹参对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞肌浆网钙转运干预作用研究

【作者】 林谦； 孙娅楠； 农一兵；

【机构】 北京中医药大学东方医院；

【摘要】 目的:研究黄芪注射液、丹参注射液及其联合应用对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞内钙瞬变的影响,探讨其抑制心肌肥大向心衰演变的作用机制。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组(Control,C)、肥大模型组(Model,M)、丹参注射液组(DS)、黄芪注射液组(HQ)、丹参黄芪组(DQ),在造模后不同时点应用Fluo-4荧光染料,用激光共聚焦显微镜(Laser Scanning ConfocalMicroscopy,LSCM)对单个心肌细胞进行线扫描,得到荧光强度-时间作用曲线,通过白编软件计算出各时点荧光强度峰值及钙瞬变时间宽度。采用RT-PCR法及Western blot法测定不同时点丹参注射液和黄芪注射液对钙离子转运关键蛋白SERCA2a、PLB mRNA转录水平及蛋白表达的影响。结果:1.钙瞬变:AngⅡ可使钙瞬变荧光强度峰值降低(P<0.05),并随时间递减,致钙瞬变半高宽增加,随时间递增,48h和72h明显高于正常组(P<0.01)。丹参注射液48h可显著回升钙瞬变荧光强度峰值(P<0.01),黄芪注射液在24h及48h可对荧光强度峰值起到回升作用(P<0.01),联合用药组则在全程起到疗效。各用药组可使钙瞬变半高宽度降低(P<0.01)。48h作用最为显著,至72小时作用减弱,但仍有统计学意义(P<0.01),而此时联合用药组疗效明显优于单药应用。2.RT-PCR检测:模型组SERCA2a mRNA转录水平在造模后48h及72h明显低于正常组(P<0.01),PLB mRNA转录水平在造模后72h明显下降(P<0.01),48hSERCA2a/PLB比值明显降低(P<0.01)。丹参注射液在给药后48h及72h可上调SERCA2a mRNA表达(P<0.01),72h可使PLB mRNA表达上调(P<0.01),48h升高SERCA2a/PLB比值(P<0.01)。黄芪注射液在给药后各个时点,与模型组相比均上调SERCA2a mRNA表达水平(P<0.01),联合用药组在给药后72h效果显著(P<0.01)。黄芪注射液及联合用药组则在给药后各个时点与模型组比较升高SERCA2a/PLB比值(P<0.01)。3.Western blot检测:造模后各时点模型组和正常组相比SERCA2a蛋白含量有所下降(P<0.05),48h模型组PLB蛋白含量较正常组有显著差异(P<0.01),各时点模型组和正常组相比SERCA2a/PLB比率显著下降(P<0.01)。给药后各时点黄芪注射液组SERCA2a蛋白含量与模型组相比有统计学意义(P<0.01),48h黄芪注射液组PLB蛋白含量较模型组有所下降(P<0.01)。联合用药组于给药后72小时与模型组相比SERCA2a蛋白含量有显著差异(P<0.01),给药后各时点黄芪注射液组及联合用药组SERCA2a/PLB比率与模型组比较呈上升趋势(P<0.01)。结论:AngⅡ在心肌细胞从肥大期走向衰竭期的过程中可引起心肌细胞肌浆网钙转运相关蛋白的mRNA转录水平,蛋白表达水平的动态变化,影响心肌细胞内钙离子浓度,从而影响钙瞬变的正常发生。提示AngⅡ能够诱导钙摄取关键蛋白的转录与翻译水平的变化从而导致肌浆网钙转运的障碍。黄芪、丹参可以在不同程度上抑制AngⅡ的上述作用。在慢性心力衰竭中,黄芪、丹参的长疗程干预不但可以保护心脏的整体功能,而且对单个心肌细胞的收缩特性也具有保护作用,可以拮抗心衰时心肌细胞钙瞬变及其调控蛋白的异常变化。其抗心衰作用可能部分是通过减缓心力衰竭时心肌钙调控蛋白的变化,从而改善心肌细胞的钙瞬变,致使心肌细胞的收缩特性得到保护所致。更多还原