脂筏介导的内源性大麻素对肝癌细胞作用机制研究

【作者】 吴文杰； 阳乔； 曹芹芳； 张耀文； 唐望先；

【机构】 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所；

【摘要】 目的:研究内源性大麻素(AEA,anandamide)以脂质为基础的信号途径对肝癌细胞HepG2的作用机制,探讨AEA在肝癌发生发展中的作用。方法:免疫荧光检测脂肪酸水解酶(fatty acid hydrolytic enzyme)FAAH、CB1受体和CB2受体在肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2中的定位。用不同浓度的AEA及膜胆固醇耗竭剂甲基-β-环糊精(MCD,methylβ-cyclodextrin)孵育LO2细胞和HepG2细胞,流式细胞术(FCS)PI单染法检测细胞的坏死率。同时,Western Blot检测LO2和HepG2细胞中FAAH、CB1受体和CB2受体的蛋白表达及其下游信号通路p-P38MAPK和p-JNK的表达变化。结果:免疫荧光显示FAAH、CB1受体和CB2受体在LO2和HepG2细胞膜和细胞浆中均有表达,且FAAH在HepG2细胞中高表达而在LO2细胞中低表达,CB1受体在LO2细胞和HepG2细胞中均低表达,CB2受体在LO2细胞和HepG2细胞中均高表达。FCS检测发现AEA呈剂量依赖性地导致HepG2细胞坏死而对LO2细胞无明显影响,MCD孵育后的HepG2细胞坏死率明显减少。Western Blot检测FAAH、CB1受体和CB2受体在LO2和HepG2细胞中的表达量与激光共聚焦结果一致,p-P38MAPK和p-JNK的变化与AEA作用浓度呈剂量依赖关系。结论:内源性大麻素AEA可以有效地导致肝癌细胞坏死,这些效应除与CB1受体和CB2受体有关外还可能与脂质双分子膜上的富集胆固醇的结构域-脂筏有关,在AEA的作用中FAAH能对肝细胞起到保护作用,AEA致HepG2细胞的坏死可能与p-P38MAPK和p-JNK相关信号传导途径的激活有关。更多还原