大鼠肝细胞生长因子与肝再生增强因子融合基因真核表达质粒的构建及鉴定

【作者】 王晓东； 林镯； 张友才； 陈永平； 许烂漫； 陈国荣； 巩跃文；

【机构】 温州医学院附属第一医院感染科； 温州医学院附属第一医院病理科； 加拿大美尼托巴大学药学院；

【摘要】 目的:构建大鼠肝细胞生长因子(rHGF)与肝再生增强因子(rALR)融合基因的真核表达质粒并进行鉴定,为肝纤维化的治疗提供新的方法奠定实验基础。方法:首先分别以重组质粒pUC18-rHGF和pUC18-rALR为模板,进行PCR扩增,获得rHGF和rALR的基因片段,然后利用重叠延伸PCR方法将获得的基因片段通过一个连接序列(linker)进行连接,构建融合基因rHGF-linker-rALR。最后将融合基因定向插入到pcDNA3.1真核表达质粒的KpnⅠ和XbaⅠ酶切位点之间,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-rHGF-linker-rALR并进行双酶切及测序鉴定。结果:rHGF和r ALR的PCR扩增产物电泳后分别观察到长2.2kb和0.4kb的条带,与理论值相符。重叠延伸PCR获得的融合基因产物电泳后观察到长2.6kb的条带,与预期值一致。重组真核表达质粒pcDNA3.1-rHGF-linker-rALR经双酶切,电泳后观察到长2.6kb和5.4kb的两条DNA条带,与预期值相符,测序鉴定结果表明序列正确。结论:成功构建了大鼠肝细胞生长因子与肝再生增强因子融和基因的真核表达质粒,为肝纤维化的基因治疗奠定了实验基础。更多还原