RNAi沉默galectin-1表达对LST-R1细胞表型的影响

【作者】 童华生； 张亚历； 姜泊；

【机构】 广州军区广州总医院； 南方医科大学南方医院消化病研究所；

【摘要】 目的采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,构建galectin-1基因特异siRNAs真核干扰载体,检测LST-R1细胞galectin-1表达变化,观察LST-R1细胞表型改变。方法设计2对galectin-1基因特异性siRNAs,确定相应的shRNAs,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒pSUPER.puro,构建galectin-1 siRNA表达载体,与pcDNA6/TR共转染LST-R1细胞,嘌呤霉素(0.8μg/ml)进行阳性克隆筛选。四环素(4μg/ml)诱导48 h后,RT-PCR检测galectin-1 mRNA水平改变,免疫印迹和细胞免疫化学检测蛋白质水平的改变,观察LST-R1细胞表型变化。结果成功构建发夹样GALECTIN-1 siRNA真核表达载体p-shRNA1和p-shRNA2,建立相应稳定的p-shRNA1-LST、p-shRNA2-LST细胞系。RNAi下调galectin-1表达后,LST-R1细胞与Ⅰ型胶原的粘附增加,同质粘附细胞减少,趋化运动升高,软琼脂糖集落形成实验表明细胞克隆形成数增多(P<0.001)。结论Galectin-1的下调表达可引起LST-R1细胞侵袭相关表型增加,提示galectin-1可能参与了LST病变浅表性扩散特性的形成。更多还原