烟曲霉Afyap1基因功能研究

【作者】 乔建军； 马彦； 万喆； 李若瑜； 刘伟；

【机构】 北京大学第一医院皮肤科北京大学真菌和真菌病研究中心； 浙江大学医学院附属第一医院皮肤科；

【摘要】 目的:利用根癌农杆菌介导的烟曲霉基因敲除技术对烟曲霉Afyap1基因进行敲除,并探讨其在抵抗氧化杀伤及侵袭性曲霉病发生中的作用。方法:用pyrG作为筛选标记、根癌农杆菌介导的方法敲除烟曲霉Afyap1基因。Afyap1基因敲除株命名为△Afyap1。再将Afyap1回补到△Afyap1得到菌株Re-△Afyap1。将能在烟曲霉内自主复制的含Afyap1基因的质粒、空白对照质粒转入烟曲霉,分别得到菌株MC、E。斑点法比较野生株（WT）、△Afyap1、Re-△Afyap1、E、MC对氧化剂的敏感性;显微镜下观察各菌株的产孢情况。比较WT、△Afyap1、Re-△Afyap1、E、MC对侵袭性肺曲霉病小鼠致病性的差异。结果: Afyap1转化子的同源重组率为43.8%（7/16）。Afyap1基因敲除株烟曲霉△Afyap1对H₂O₂及甲萘醌的敏感性比野生株高。MC对3种氧化剂——H₂O₂、甲萘醌以及二酰胺杀伤的抵抗能力比E强,这表明增加Afyap1基因在烟曲霉内的拷贝数能增强其抵抗氧化杀伤的能力。WT、△Afyap1、Re-△Afyap1、MC对免疫缺陷小鼠的致病性无明显差异。结论:①与以前的烟曲霉基因敲除方法相比,以pyrG为筛选标记、根癌农杆菌介导的烟曲霉基因敲除方法简便有效。②虽然在体外Afyap1基因参与烟曲霉抵抗氧化杀伤,但它不影响烟曲霉的致病性。更多还原