杜仲幼胚离体培养及体细胞胚诱导发生

【作者】 杨智超； 刘艳丽； 曹小勇；

【机构】 陕西理工学院生物科学与工程学院 陕西省资源生物重点实验室；

【摘要】 幼胚培养材料采自陕西理工学院校园。2012年3月31日杜仲开始扬花,对雌花进行定期取样观察,以三个不同发育状态的完整胚胎作为实验材料,分别为I#:6月4日取样,此时胚长约0.5mm,处于心形胚早期;II#:6月12日取样,胚长约1-2mm,为鱼雷形;III#:6月21日取样,胚长约5mm,约为成熟胚的1/2。以MS为基本培养基,添加不同激素及组合进行培养,包括0.5～4mg/L2,4-D、0.5～4mg/L6-BA、0.5～2mg/LTDZ、2,4-D+6-BA、6-BA+GA3、TDZ+GA3、6-BA+NAA、6-BA+NAA+TDZ+GA3。I#材料接种后一周逐渐变黑,15天后几乎全部死亡;III#材料接种后迅速生长,15天后多数萌发形成了幼苗;II#材料接种3天后可以看到明显的伸长,12天左右,附加2,4-D的培养基中在子叶基部及受伤部位最先形成愈伤组织;15天后在6-BA+GA3、TDZ、TDZ+GA3、6-BA+NAA+TDZ+GA3培养基中开始形成不定芽;培养30天进行观察统计结果显示,高浓度2,4-D(4mg/L),中等浓度2,4-D(2mg/L)、NAA(1mg/L)与6-BA组合,对愈伤组织诱导及生长影响较好,而中等浓度的6-BA(2mg/L)、TDZ(1mg/L)对不定芽发生影响较好,不定芽发生率可达50%。在附加0.5mg/L2,4-D的培养基中,两片子叶中间及子叶与下胚轴连接的部位形成了浅黄色颗粒状的愈伤组织,培养约90天,40个外植体中有3个形成体细胞胚。杜仲离体培养使用成熟合子胚及萌发幼苗较多,如Chen(1995)、Chen(2008)、唐亮(2010)、孙宁(2009)、李岩(中草药)等,利用未成熟幼胚仅见唐亮(2010)的报道,仅获得胚性愈伤组织,目前尚未见到杜仲体细胞胚发生的报道,我们利用幼胚首次获得体细胞胚,仍需进一步研究以提高发生率并缩短培养时间。更多还原