盐胁迫对蒙古黄芪DNA甲基化的影响

【作者】 韩雅楠； 赵秀娟； 蔡禄；

【机构】 内蒙古科技大学生物工程与技术研究所；

【摘要】 蒙古黄芪（Astragalus membranaceus）属珍稀中药材,分布于黑龙江、吉林、内蒙古等地,可以补气固表、托毒生肌、利水退肿,治气短心悸、体虚浮肿、慢性肾炎、久泻等疾病。喜凉爽气候,耐寒耐旱,不宜粘土和重盐碱地。而近年来由于草原荒漠化进程的加剧以及土壤盐碱化的威胁等原因,使野生蒙古黄芪资源出现稀缺现象。而其中DNA甲基化对植物的生长发育起着重要的调控作用,本实验旨在了解其调控机理的条件下,实施分子手段调控其抗盐性,使蒙古黄芪资源在盐环境下能够正常生长,保护资源的可持续性。实验采用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术检测盐胁迫下蒙古黄芪的基因组DNA的5’-CCGG序列的甲基化变化。经过限制性酶EcoRⅠ/HpaⅡ和EcoRⅠ/MspⅠ酶切,酶连,扩增产物产生多态性。针对特异性条带回收,纯化后与PMD-18T Simple Tector连接,转化到感受态细胞中,检测后测序。结果显示:统计聚丙烯酰胺凝胶电泳条带,根据未甲基化（HpaⅡ,MspⅠ均有带）;半甲基化（H有带,M无带）;全甲基化（H无带,M有带）的原则,以4对引物进行选择性扩增,共检测到不同浓度甲基化修饰位点共66个,其中有41个属于全甲基化修饰位点,25个属于半甲基化修饰位点,由此可见,蒙古黄芪基因组CCGG位点发生甲基化的方式主要是以内部胞嘧啶(C^5mCGG)双链甲基化为主。此外,"CCGG/GGCC"位点甲基化修饰平均比例为38%;并且随着氯化钠浓度的增加,蒙古黄芪幼苗基因组MSAP水平呈下降趋势。更多还原