肌球蛋白Ⅱ ATP酶活性微量方法的优化及其初步应用

【作者】 赵晶； 张冠军； 刘静； 寇俊萍； 余伯阳；

【机构】 中国药科大学中药复方研究室；

【摘要】 目的:肌球蛋白Ⅱ具有广泛的生理病理功能,为防治青光眼、肿瘤转移、心脑血管疾病的潜在靶标。本研究拟建立一种改进的肌球蛋白IIATP酶活性的微量测定方法,并初步应用于天然小分子抑制剂的筛选。方法:基于经典的钼蓝法原理加以改进。通过考察并优化了反应时间、pH、钙离子浓度等影响酶促反应的相关因素,并以国际通用的肌球蛋白ⅡATPase特异性抑制剂-blebbistatin为工具药,评价了所建立方法的有效性。并考察了30余种天然产物的抑制活性。结果:当ATP浓度增加至为0.5 mM时,反应体系的吸光度基本达到峰值;pH对肌球蛋白IIATPase影响不明显,在pH 7.0时有相对最强酶活性;钙离子浓度为1.0 mM时,肌球蛋白Ⅱ与钙离子共孵10 min即可达到最佳催化活性;显色反应在10 min时已进行完全。blebbistatin对肌球蛋白ⅡATPase活性有显著的抑制作用,与国外文献报导的数值一致。同时,从天然产物中筛选到一种对MyosinⅡATPase的活性有相对显著抑制作用的小分子抑制剂。结论:优化改进了一种肌球蛋白ⅡATPase体外微量测定方法,具有简便、经济、快速的特点,适用于肌球蛋白ⅡATPase的抑制剂筛选,为防治相关疾病提供可能的先导化合物。更多还原