壁虎醇提物对人食管癌细胞EC9706增殖及凋亡蛋白表达的影响

【作者】 王晓兰； 王建刚； 宋佳玉； 李瑞芳；

【机构】 河南科技大学医学院；

【摘要】 目的研究壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞株EC9706的生长抑制作用及其机制。方法通过MTT法检测不同浓度、不同时间壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞的生长抑制作用;倒置显微镜观察不同浓度壁虎醇提物作用细胞24小时后细胞形态的改变;吉姆萨染色后光学显微镜下观察细胞凋亡的形态改变;应用SP免疫组化法通过BI-2000图像分析系统计算平均光密度值来检测细胞内凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果5.5、6、6.5、7、7.5、8 g·L^-1浓度壁虎醇提物在24,48,72 h的抑瘤率分别为8%、13%、23%、40%、68%、76%;28%、37%、56%、77%、86%、88%;42%、54%、71%、83%、92%、93%,各浓度组壁虎醇提物能够明显抑制EC9706食管鳞癌细胞株的生长（与阴性对照比较,P<0.01）,其抑制作用随时间、浓度的增加而不断加强,呈一定剂量依赖性和时间依赖性;5.5 g·L^-1～8 g·L^-1壁虎醇提物处理细胞24小时后,倒置显微镜下观察,阴性对照组细胞大小均一呈上皮型贴壁生长,相互连接成片,细胞多呈梭形,形状规则,生长旺盛;壁虎醇提物组细胞表现为胞浆发生空泡变性,细胞数量明显减少,贴壁细胞变小、变圆并浮起,形态完整性受破坏,形成大量细胞碎片,上述细胞改变随药物浓度增加,表现越明显。Geimsa染色显示,阴性对照组细胞胞浆染色较浅呈淡兰色,胞核染成紫红色,细胞胞浆少,核浆比例大,核膜表面光滑,形态大小均一,核仁清晰可见;7 g·L^-1壁虎醇提物处理细胞24 h后,部分细胞呈凋亡形态改变,细胞体积缩小,核膜表面不光滑、皱缩,形态不规则;染色质固缩,核深染。免疫组化结果显示壁虎醇提组(6 g·L^-1,7 g·L^-1)处理细胞24 h后,细胞内Bax蛋白表达的平均光密度值分别为0.842±0.013,0.851±0.017;细胞内Bcl-2蛋白表达的平均光密度值分别0.853±0.033,0.964±0.012,与空白对照组比较,细胞内Bcl-2蛋白无明显变化,而Bax蛋白表达升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论:壁虎醇提物能够抑制EC9706细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能通过上调Bax的表达,通过改变凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值而诱导细胞凋亡。更多还原