抗糖尿病肾病新药大黄酸的临床前药物代谢动力学研究

【作者】 孙建国； 张锦雯； 王广基； 彭英； 艾华； 谢海棠； 黎磊石； 刘志红； 章海涛； 许美娟； 郑超男； 吕天；

【机构】 中国药科大学药物代谢动力学重点实验室； 南京军区南京总医院 解放军肾脏病研究所；

【摘要】 目的:大黄酸（Rhein）为大黄游离蒽醌衍生物的单体之一,大黄酸具有广泛的药理活性,南京军区总院黎磊石等研究表明,大黄酸对Ⅰ,Ⅱ型糖尿病的后期并发症糖尿病肾病有良好的治疗效果。为了支持其进一步的研究,本文进行了系统的大黄酸药物代谢动力学研究。方法:采用HPLC-FLD法进行药物浓度检测,在大鼠和Beagle犬体内进行吸收、分布、排泄、代谢研究,并考察了大黄酸在肠肝微粒体中的稳定性。结果:吸收研究:大鼠i.g 35、70和140 mg/kg大黄酸后,估算的消除相半衰期(T_1/2)分别为3.22±1.21,3.68±1.42,4.30±1.55 h,实测的峰时间(T_max)分别为0.42±0.26,0.50±0.27,0.38±0.14 h,达峰浓度(C_max)分别为37.96±12.87,54.64±11.60,67.17±14.62μg/ml。大鼠iv 0.35、0.70和1.40 mg/kg大黄酸后,估算的T_1/2分别为3.55±1.55、4.93±1.50和4.47±1.03 h。用血浆药物浓度-时间曲线下面积（AUC）法以i.v中剂量给药进行计算,求得大鼠在35,70和140 mg/kg三个剂量下i.g大黄酸后体内的绝对生物利用度分别为19.4%,23.81%和16.4%。大黄酸i.g和i.v给药后,AUC与剂量及C_max与剂量关系表明AUC与剂量间呈一定的线性关系。三种剂量的半衰期相近。提示在研究的剂量范围内,大黄酸在大鼠体内药代动力学行为近似是线性的。Beagle犬静注0.4 mg/kg和灌胃给予20 mg/kg大黄酸后,算得T_1/2分别为1.77±0.93、3.25±0.85小时,MRT分别为0.95±0.22、4.29±0.57小时。灌胃给予20 mg/kg大黄酸后,达峰时间和达峰浓度分别为2.75±1.84 h和9.71±4.89μg/ml。利用AUC计算求得Beagle犬体内大黄酸口服绝对生物利用度为49.7±7.4%,与大鼠的绝对生物利用度有一定的差异。Beagle犬每天一次,连续7天口服20.0 mg/kg大黄酸后第5天血浆中药物浓度基本达到稳态,第7天达稳态后单次给药的达峰时间为1.17±0.41 h,达峰浓度为12.05±4.17μg/ml,稳态血药浓度为2.05±0.55μg/ml,估算的T_1/2为3.53±1.15 h。Beagle犬进食后单剂量灌胃20 mg/kg大黄酸后,T_max及C_max与禁食情况下的Beagle犬数据比较,并无时间上的延迟及吸收峰强度的显著改变,提示进食可能不影响其吸收。分布和代谢研究结果:大鼠ig 70 mg/kg大黄酸后,广泛分布于组织中。大黄酸在体内分布较广,在所测定的组织中,以胃、肾、肠、肝和肺浓度最高,脑中药物浓度最低。排泄及代谢研究结果:大鼠ig 70 mg/kg大黄酸后,大鼠20小时内胆汁中的排泄分数约为0.66±0.11%。60小时内,原药在尿和粪便中的排泄分数分别为6.0±0.6%和16.9±2.5%。大黄酸在大鼠尿、粪便和胆汁中的总排泄量,不到给药量的25%,提示大黄酸主要在体内代谢消除。对排泄试验中的胆汁、尿液及粪便样品用HPLC和PDA检测以及LC-MS扫描后鉴别,未找到Ⅰ相代谢物峰,其Ⅰ相代谢物需要进一步研究。对尿液和胆汁进行葡萄糖醛酸酶及硫酸酯酶酶解处理后进行检测,发现大黄酸在尿液中具有明确的葡萄糖醛酸及硫酸结合物,其中尿液中Ⅱ相代谢物占总排泄量的73.1±10.9%。体外药物相互作用实验结果表明,大黄酸在肝、肠微粒体体系中稳定,未发现转化为大黄素,故可排除口服药物后毒性会增强的可能性。大黄酸对体外人肝微粒体CYP3A4、CYP 1A2和CYP 2C9均有一定的抑制,IC₅₀分别为80μM、20μM和40μM。提示大黄酸临床给药时应注意药物代谢相互作用的发生。特别是主要经CYP1A2酶专一代谢的药物,应考察体内药物相互作用。大黄酸药物浓度在0.5-50μg/ml范围内,大黄酸与大鼠血浆蛋白结合率约为88.38～93.46。与人血浆蛋白结合率约为94.31～95.93%。人与大鼠血浆蛋白结合率无显著性差异,提示大黄酸蛋白结合率无种属差异。结论:大黄酸在大鼠体内药代动力学基本呈线性过程,在组织中分布广泛,原药排泄分数较低,主要以Ⅱ相代谢物进行排泄,对CYP450酶有一定的抑制作用,提示临床研究应考察药物相互作用。更多还原