小檗碱对人肝癌HepG2细胞中异源物核受体CAR及代谢酶CYP3A4表达的影响

【作者】 张磊； 潘海晖； 王昕； 王淑梅； 章国良；

【机构】 北京大学医学部基础医学院药理系；

【摘要】 目的:考察中药黄连有效成分小檗碱对人肝癌HepG2细胞株中异源物代谢性核受体CAR及药物代谢酶CYP3A4表达的影响。方法:采用带有新霉素抗性基因（G418）的质粒pCR3作为mCAR基因的载体转染HepG2细胞并对其进行筛选。用阳离子脂质体转染带有目的基因的红色荧光蛋白表达载体瞬时转染HepG2细胞,在荧光显微镜下考察转染效率。四氮甲唑蓝（MTT）比色法及刃天青（Alamar-Blue）法检测药物对HepG2细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测基因表达水平。结果:经G418筛选得到的HepG2单克隆细胞株2C4与阳性对照（质粒载体pCR3-mCAR）的PCR扩增产物的融解曲线的峰形相同,解链温度一致,且琼脂糖凝胶电泳证明两者的PCR扩增片段大小相同。不同浓度小檗碱（0.2,0.5,1,2,5,10,20,50μM）可剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖,在2～50μM浓度范围内与HepG2细胞共孵育24h抑制率分别为4.7、19.1、22.3、31.3及44.9%,半数抑制浓度(IC₅₀)为68.9μM。与对照相比,诱导剂利福平（50μM）在与HepG2细胞共孵育24小时后可使CYP3A4 mRNA表达上调22.16±9.23倍,而3.6μM小檗碱在孵育24小时后可上调CYP3A4 mRNA表达18.22倍,孵育48小时后则上调CYP3A4 mRNA表达2.19倍。结论:外源性mCAR基因可通过阳离子脂质体转染入并表达于HepG2单克隆细胞株2C4中。小檗碱可抑制HepG2细胞增殖,并可上调HepG2中CYP3A4 mRNA表达水平,其机制尚有待于进一步探讨。更多还原