SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR测定肠道病毒71型(EV71)RNA拷贝数方法的建立

【作者】 朵建英； 王卫； 佟巍； 丛喆； 蒋虹； 乔红伟； 刘强； 魏强； 张连峰； 秦川；

【机构】 中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所；

【摘要】 目的建立SYBR Green荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定肠病毒71型(EV71)病毒RNA。方法设计EV71 VP1保守区引物,优化real time RT-PCR条件,运用NASBA方法扩增EV71病毒RNA,计算拷贝数,经10倍系列稀释做出标准曲线,作为EV71病毒RNA定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司Quanti Tect SYBRGreen RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100copies/μL,PCR扩增效率达到99.5%。结论SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR法测定EV71病毒RNA拷贝数的方法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于EV71病毒RNA载量的定量测定。更多还原