RNA干扰ERCC1基因表达对肺腺癌细胞A549/DDP顺铂耐药的影响

【作者】 高赟； 苏丹； 应莉莎； 吕汪霞； 马胜林；

【机构】 浙江省肿瘤医院；

【摘要】 目的:切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementing gene1,ERCC1)是核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)通路重要成员之一,研究表明ERCC1基因表达上调是肺癌顺铂耐药的重要原因,因此以ERCC1为靶基因的靶向治疗逆转肿瘤耐药,增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性成为肺癌治疗的新途径。本研究旨在探讨小干扰RNA沉默ERCC1基因对肺腺癌耐药细胞A549/DDP顺铂敏感性的影响。方法:将体外设计合成针对ERCC1的小分子RNA(siRNA)转染A549/DDP细胞,RT-PCR检测ERCC1 mRNA水平;Western Blot检测ERCC1蛋白表达的变化;MTT检测RNA干扰后细胞药物敏感性改变。结果:ERCC1 RNAi干扰后ERCC1 mRNA表达指数降低,明显低于干扰前细胞组,干扰后ERCC1 mRNA表达抑制率为77%。转染ERCC1 siRNA降低了ERCC1蛋白的表达水平。MTT显示分别用4,8,16,32,64,128ug/ml顺铂处理细胞48h后,转染ERCC1 siRNA细胞组较对照组敏感性明显增高,干扰前A549/DDP细胞IC50为21.4ug/ml,干扰后A549/DDP细胞IC50下降为12.6ug/ml。结论:ERCC1-siRNA能有效干扰ERCC1基因的表达,阻断mRNA向蛋白质的信息传导,进而达到对目的基因的抑制作用。MTT实验显示转染ERCC1-siRNA后,A549/DDP细胞对顺铂的反应性明显增强,提高了化疗药物对肿瘤细胞生长的抑制作用,部分逆转了A549/DDP细胞对顺铂的耐药。更多还原