受DNA甲基化调控的IncRNA-AY927547在原发性肝癌中的作用机制研究

【作者】 赵晨曦； 郭瀛军； 黄金凤； 孙树汉；

【机构】 第二军医大学医学遗传学教研室；

【摘要】 目的:研究在原发性肝癌发生过程中受DNA甲基化调控的lncRNAs对肿瘤形成的影响及其分子机制。方法:甲基化相关的lncRNAs芯片数据进行分析,筛选潜在受DNA甲基化调控异常表达的lncRNAs。通过实时定量PCR技术检测lncRNAs的表达量改变;亚硫酸氢盐修饰与甲基化测序技术检测甲基化水平改变。通过siRNA干扰及全长载体质粒的构建在细胞水平对lncRNAs进行干扰及过表达后分析肿瘤表型:利用CCK-8法检测细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的迁移、侵袭能力;Annexin-FITC荧光法检测细胞凋亡。利用RNApull-down及western blot技术筛选与lncRNAs相结合的靶蛋白分子。结果:筛选出lncRNA-AY927547,其在肝癌样本中的表达量呈明显下调,且甲基化程度明显增高。干扰lncRNA-AY927547后,肝癌细胞的迁移及侵袭能力受到明显促进。过表达1ncRNA-AY927547后,肝癌细胞的迁移及侵袭能力受到明显抑制。Western blot显示与1ncRNA-AY927547正义链及反义链相结合的蛋白谱呈明显差异。结论:lncRNA-AY927547能够受到DNA甲基化的调控,在原发性肝癌的发生及转移过程中通过其结合靶蛋白发挥抑癌基因的作用,为发展表观遗传学药物治疗原发性肝癌提供了新的思路和靶向。更多还原