多脊椎蒙古羊Hoxc8 exon-1甲基化分析

【作者】 陈琦； 赵静； 张立岭； 马月辉；

【机构】 内蒙古医学院分子生物学研究中心； 内蒙古农业大学动物科学与医学学院； 海南大学农学院； 中国农科院畜牧所；

【摘要】 蒙古羊中多脊椎个体比例达到25%,其胸椎和腰椎比普通羊多1～2枚,具有优良的肉质特性和出色的产肉性能。但一直没有发现多脊椎性状形成的原因以及这种变异的传递规律和表达方式,至今仍未找到简便而又可靠的鉴别和选择的方法。本研究探索蒙古羊多脊椎性状与Hoxc8 exon-1的甲基化比例是否可以成为多脊椎蒙古羊早期选种的DNA分子标记。克隆多脊椎蒙古羊(14个胸椎)和正常蒙古羊(13个胸椎)的Hoxc8 exon-1,超声波破碎基因组DNA并变性。用5-甲基胞嘧啶抗体做选择性免疫反应,经抗体结合磁珠免疫沉淀,分离纯化甲基化DNA。设计2对多脊椎蒙古羊Hoxc8 exon-1引物进行实时定量PCR,分别分析免疫沉淀后的甲基化DNA浓度。引物P2扩增,6只多脊椎蒙古羊和4只正常的蒙古羊样本校正后的甲基化DNA的浓度分别为11.50%、11.00%、5.28%、4.49%、2.89%、2.41%和1.20%、0.60%、0.35%、0.03%。两实验组差异显著(P<0.05)。引物P1扩增,两实验组甲基化DNA浓度差异不显著(P>0.05)。P2引物扩增Hoxc8 exon-1的甲基化DNA浓度可以作为多脊椎蒙古羊早期选种的DNA分子标记。更多还原