靶向干扰Hep-2细胞P/N1的研究

【作者】 孙绍华； 马会平； 刘剑利； 李福才；

【机构】 中国医科大学医学遗传学教研室；

【摘要】 喉癌是一种头颈部恶性肿瘤,由于地域因素,我国东北地区是喉癌的高发区域。由于喉癌对放疗及化疗均不敏感,从分子细胞遗传学水平上寻找喉癌治疗的突破点有其重要意义。PIN1是人类肽基氨酰基异构酶,能特异性地催化磷酸化的丝/苏一脯氨酸基序发生异构,改变底物蛋白的构象,调节底物蛋白的功能。PIN1在肿瘤的发生过程中发挥重要作用,被称为是肿瘤发生的催化分子,可通过多种机制诱导细胞增殖和抑制细胞凋亡,导致肿瘤的发生。研究表明,PIN1在人类许多肿瘤中过表达。本研究应用RT-PCR方法检测喉癌组织中PIN1mRNA表达情况,结果在喉癌组织中PIN1 mRNA的表达明显高于癌旁组织。为了进一步研究该基因在喉癌中的作用机制,构建了靶向PIN1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对喉癌Hep-2细胞PIN1基因的抑制作用。应用RT-PCR和Western blot分别检测了干扰PIN1基因后的mRNA、蛋白表达水平,应用MTT方法检测了RNA干扰P1N1基因细胞增殖能力的变化,应用transwell分析细胞侵袭能力的改变,流式细胞术检测干扰后细胞凋亡情况,免疫荧光检测转染前后中心体变化。结果显示,RNAi有效的抑制了PIN1基因mRNA和蛋白表达,喉癌细胞增殖力以及体外迁移力显著降低,促进喉癌细胞凋亡,并有效抑制了中心体的扩增,与对照组相比干扰后出现多极中心体的细胞数目显著减少。结论 :shRNA真核表达载体稳定转染Hep-2细胞能够有效沉默PIN1基因的表达,进而抑制喉癌细胞的增殖,因此干扰PIN1为临床靶向治疗提供了一个新的思路。更多还原