纤维堆囊菌So0157-2单酰基甘油酰基转移酶的基因克隆、序列分析及异源表达

【作者】 程媛媛； 钱云开； 黎志凤； 刘红； 吴志红； 李越中；

【机构】 山东大学微生物技术国家重点实验室；

【摘要】 纤维堆囊菌So0157-2能产生丰富的次级代谢产物,包括大量的细胞内含物。经TLC,GC-MS结合ESI/MS/MS鉴定,这些内含物主要是由碳原子数目为13～18的9种脂肪酸所形成的三酰基甘油酯。推测单酰基甘油酰基转移酶(MAGL)是其降解途径中的关键调控酶之一。为研究MAGL的作用及其机制,首先通过相似性搜索,在So0157-2基因组中获得与So ce56菌株MAGL序列高度相似的候选蛋白及其编码基因。序列分析表明:该基因序列全长981bp,编码326个氨基酸,无信号肽;氨基酸序列与数据库中脂肪酶家族序列同源,与So ce56来源的MAGL序列相似性最高,为83.2%;氨基酸序列中还含有丝氨酸水解酶类保守基序Gly-Xxx-Ser-Xxx-Gly;且二级结构包含α/β折叠水解酶结构域特征。用表达载体pET-22b(+)在大肠杆菌中表达该基因,并纯化得到纯度大于95%的水溶性重组蛋白。在pH7.0、30℃时,该酶的比活力超过商品脂肪酶的20%。本文的研究为进一步在So0157-2中敲除、回补MAGL基因,深入探讨内含物降解代谢的调控机制奠定了基础。更多还原