STK15基因沉默对其表达和细胞增殖的影响

【作者】 马会平； 刘剑利； 孙绍华； 郭兴； 姜亮； 李福才；

【机构】 中国医科大学医学遗传学教研室； 中国医科大学附属第一医院耳鼻喉科；

【摘要】 丝氨酸/苏氨酸激酶15（serine threonine kinase 15,STK15）（又称BTAK/Aurora A）一种中心体相关激酶,定位于人类染色体20q13.2,已被证实为一种癌基因。STK15基因与恶性肿瘤的发生之间存在着密切的联系,其过表达会引起中心体扩增、染色体不稳定及细胞的转化。它主要参与DNA合成后期（G₂）进入细胞分裂期（M）的转换,以及M期染色体分离过程的调控。前期研究工作表明,STK15基因的扩增及过表达可通过引起中心体异常导致非整倍体形成及细胞的转化,与诱导肿瘤的发生、发展密切相关。RNA干扰（RNAinterference,RNAi）技术是目前研究基因功能强有力的工具之一,能够用于研究特定基因的表达抑制,有望对喉癌的基因治疗提供新思路。目的探讨RNA干扰STK15基因对其表达、细胞增殖和细胞周期的影响。方法构建STK15基因特异性shRNA载体,酶切,连接,测序验证;转化感受态细菌,提取质粒;转染hep-2细胞,提取RNA及蛋白;应用real-time定量PCR及western blot检测干扰前后STK15 mRNA及蛋白质水平的表达变化:MTT法检测细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果干扰STK15基因后,其mRNA和蛋白质水平表达明显下降,real-time PCR结果显示,转染后72小时,干扰组STK15 mRNA水平较对照组降低了57%,western blot灰度比半定量检测显示,STK15蛋白水平干扰组较对照组降低了51.7%;转染后72小时细胞的抑制率达到33.86%;流式细胞仪检测发现,干扰后72小时,STK15干扰组G2期DNA含量细胞平均值为17.56%,而对照组为10.67%（P<0.05）,细胞增殖速度减慢。结论 STK15基因在hep-2细胞有丝分裂过程中起着关键作用,阻断其表达可能导致hep-2细胞有丝分裂停滞,在喉癌的早期可能就存在着STK15基因的高表达引起中心体的扩增,后者又通过细胞有丝分裂的异常而导致染色体不稳定,这可能是喉癌发生的重要机制之一,并为进一步探讨喉癌的发生机理和生物治疗肿瘤提供了一定的科学依据。更多还原