应用STR连锁分析和TPPCR方法进行强直性肌营养不良基因诊断

【作者】 曹丽华； 麻宏伟； 罗阳； 王丽波； 王述森；

【机构】 中国医科大学医学基因组学教研室； 中国医科大学附属盛京医院发育儿科；

【摘要】 目的强直性肌营养不良(myotonic dystrophy,DM)是多系统受累的常染色体显性遗传病,主要累及骨骼肌、心肌、晶状体、内分泌系统和皮肤等。DM是基因组中寡核苷酸串联重复序列存在不稳定扩增所致。目前研究认为与DM相关的基因有2个:DM1型致病基因DMPK位于19q13.3,编码强直性肌营养不良蛋白激酶(DMPK),由于该基因3’端非翻译区内三核苷酸(CTG)n重复序列拷贝数增加而发病;DM2型致病基因ZNF9位于3q21,编码锌指蛋白9(ZNF9),由其第1内含子中的四核苷酸(CCTG)n重复序列拷贝数增加而发病。本研究通过STR连锁分析和TP PCR(triplet repeat primed PCR)方法旨在鉴定一DM家系致病基因改变。方法DM家系3代5人,受累者3人,经家系成员知情同意后采集5名家系成员外周血,提取基因组DNA。PCR法扩增DM1和DM2位点,进行琼脂糖电泳,片段长度未见异常者行聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染,分析家系成员等位基因型,异常者利用TP PCR验证。结果聚丙烯酰胺凝胶电泳银染结果显示该家系中的两名患者DMPK基因3’端非翻译区内CTG重复序列标记等位基因呈现"blank allele",TP PCR扩增结果为smears,smears范围大于1000bp。而ZNF9基因第1内含子中的CCTG重复序列未见异常。结论DMPK基因3’端非翻译区内三核苷酸(CTG)n重复序列拷贝数增加为该DM家系的致病基因改变,联合应用STR连锁分析和TP PCR可以作为DM基因诊断的一线技术。更多还原