应用MLPA和STR连锁分析方法进行DMD基因诊断和产前诊断

【作者】 陈晨； 罗阳； 麻宏伟； 李岭； 张阳； 曹丽华；

【机构】 中国医科大学医学基因组学教研室； 中国医科大学附属盛京医院发育儿科； 中国医科大学医学遗传学教研室；

【摘要】 目的杜氏肌营养不良症(Duchennemuscular dystrophy,DMD)是一种以四肢近端骨骼肌进行性变性、坏死和小腿腓肠肌假性肥大为主要临床特征的X-连锁隐性遗传病,目前尚无有效治疗方法。Dystrophin基因是目前所知DMD的唯一致病基因,因此进行DMD的基因分析和产前诊断,有助于临床疑似病例的确诊和降低DMD患儿的出生率。方法应用多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)方法对DMD疑似患者和携带者dystrophin基因大片段缺失/重复突变进行筛查。在高危胎儿产前诊断中,首先对先证者,胎儿和胎儿母亲进行MLPA分析,如果三者均为MLPA非缺失/重复型,则进行核心家系的STR(short tandem repeat,STR)连锁分析,评估胎儿的受累风险或者是否为潜在携带者。结果临床诊断为DMD的患者共46例,经MLPA筛查发现有24例(52.2%)出现外显子拷贝数的改变,其中15例为多外显子缺失,5例为单外显子缺失,重复突变4例。还有1例MLPA检测显示为单外显子缺失但经PCR和测序验证为点突变c.8608C>T(p.Arg2870X),最终导致2870位的精氨酸变成了提前的终止密码。对6例可疑的携带者进行检测,其中5例携带与其患病家属相同的突变。在3个DMD高危胎儿产前诊断中,胎儿性别均为女性,均未携带与其家系中先证者相同的等位基因片段,不是潜在携带者,低发病风险。结论MLPA方法操作简单方便,节省时间,结果敏感可靠,可以作为DMD基因突变筛查的一线技术。应用MLPA技术,辅以STR连锁分析可迅速对DMD高危胎儿的受累风险进行评估,具有广泛的临床应用前景。更多还原