IRM-2小鼠全长cDNA文库构建及鉴定

【作者】 王芹； 李进； 宋力； 刘强； 唐卫生； 穆传杰； 樊飞跃；

【机构】 中国医学科学院放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室；

【摘要】 目的为分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因提供材料。方法采用Clontech公司的SMART技术构建IRM-2小鼠全长cDNA文库。按Creator SMART cDNA文库构建试剂盒提供的方法,提取雄性IRM-2小鼠脾脏总RNA,以此为模板,通过逆转录酶PowerScript反转录合成第一链cDNA,通过长距离PCR合成并扩增双链cDNA。该扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、去除小于500bp片段后,将cDNA连接到SfiⅠ消化过的PDNR-LIB质粒载体中,用电转化法将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α,得到IRM-2小鼠cDNA原始文库并用PCR法对文库的质量进行鉴定。结果构建的cDNA文库的容量为2.25×10~6个克隆,重组率达95%,平均插入片段长度约1.2kb,全长基因比例为55%。结论成功构建了高质量的IRM-2小鼠全长cD- NA文库,从而为IRM-2小鼠的辐射抗性相关基因克隆奠定了基础。更多还原