WNK4基因5′侧翼序列调控功能的研究

【作者】 张媛媛； 赵彦艳；

【机构】 中国医科大学医学遗传学教研室；

【摘要】 WNK4[with no lysine(K)-4]是新近克隆的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶—WNK家族成员之一。该基因已被定位于血压控制热点区域17q21-22。研究表明WNK4基因可以作用于肾脏远曲小管和集合管的离子转运体和离子通道,减少钠、氯、钾等离子的潴留,从而对血压和离子平衡起调节作用。目前大量的研究集中在探索WNK4基因的功能上,但WNK4基因上游调控功能仍不清楚。本研究构建了系列截短的hWNK4基因启动子萤光光素酶报告基因表达载体pGL3-promotor,以pRL-TK为内参照质粒,瞬时转染HEK293细胞,检测萤光素酶相对表达活性。结果显示在hWNK4基因启动子区域有多个功能性调控区域,通过生物信息学软件分析预测该启动子区域可能存在一个启动基因最适表达活性的关键序列AP-1。随后我们通过凝胶迁移或电泳迁移率实验和染色质免疫共沉淀技术鉴定了hWNK4基因5’侧翼序列的AP-1反应元件。进一步我们将转录因子AP-1(c-jun、c-fos)的表达载体分别与不同启动子区域的萤光素酶报告基因表达载体瞬时共转染HEK293细胞,结果显示其中一个载体在转染了转录因子后萤光素酶表达活性明显升高。接着我们通过RT-PCR和Western Blotting方法检测转录因子AP-1对HEK293细胞WNK4基因表达的影响。该研究为探索WNK4基因表达调控机制以及鉴定WNK4基因启动子区域顺式反应元件奠定了基础。更多还原