三例乳腺特殊肿瘤患者的线粒体DNA突变、缺失及拷贝数变化

【作者】 贺静； 陈涛； 曲建春； 白益东； 吕建新；

【机构】 浙江省医学遗传学重点实验室； Department of Cellular and Structural Biology of Texas Health Science Center at San Antonio,San Antonio；

【摘要】 目的分析三例乳腺特殊肿瘤(早发性乳腺肿瘤、乳腺分叶状肿瘤以及乳腺腺病合并甲状腺癌)患者线粒体DNA (mtDNA)的突变、缺失和拷贝数变化情况。方法酚-氯仿法提取患者的血液以及冰冻切片的基因组DNA,采用24对引物对线粒体的全序列进行PCR扩增并纯化后测序,通过CodonCode Aligner软件将测序结果与剑桥标准序列进行比对分析,对所发现的突变以及编码氨基酸的多态性改变进行保守性分析。利用巢式PCR来初步检测缺失,将经测序验证的TA载体所构建的质粒作为标准品,采用TakManTM探针法检测所有标本的拷贝数并对缺失进行定量分析。结果在三例患者的组织中共发现了6个点突变,分别为早发性乳腺肿瘤患者的mtDNA 303-309 C8→C7突变,乳腺分叶状肿瘤患者的T992T/C与G2673A/G异质性突变,乳腺腺病合并甲状腺癌患者的T1862C、11032-11038 A7→A6与G16463A突变,其中992、1862与2673位点是尚未报道的突变位点均高度保守,D-loop区的两个位点303-309以及16463位点均已报道,而11032-11038 A7→A6的改变导致移码突变从而致使氨基酸的翻译提前终止,该突变仅在前列腺癌及嗜酸细胞瘤中报道过,在甲状腺癌中尚属首次发现。在早发性乳腺肿瘤患者以及乳腺腺病合并甲状腺癌患者的所有标本中均发现了4977bp的大片段缺失,而在乳腺分叶状肿瘤患者中未发现大片段缺失。对所有标本进行拷贝数分析发现同一患者的不同组织的拷贝数不同,组织高于血液、癌组织高于癌旁正常组织。结论通过对以上三例乳腺特殊肿瘤患者的研究发现,mtDNA的突变、大片段缺失以及拷贝数变化在这三例肿瘤的发生过程中可能发挥重要的作用。更多还原