EB病毒诱发淋巴瘤的实验研究

【作者】 甘润良；

【机构】 南华大学医学院病理学教研室,肿瘤研究所；

【摘要】 我们通过构建人淋巴细胞(hu-PBL)/SCID嵌合体小鼠,建立了EBV诱发人正常淋巴细胞发生肿瘤模型,因而进一步肯定了EB病毒致人肿瘤的假说,获得了EBV引起人类正常细胞在体内发生肿瘤的直接依据。首次发现监测hu-PBI/SCID小鼠血清中人IgG水平升高可作为该动物模型预测肿瘤发生的指标;对hu-PBL/SCID嵌合体小鼠给予环孢素A能抑制移植物抗宿主反应(GVHR)的发生,并且发现检测hu-PBL/SCID嵌合体小鼠血清中sIL-2R水平可监测GVHR的发生,从而稳定地建立了EB病毒诱发淋巴瘤模型。发现EBV诱发性淋巴瘤的分子病变,包括EB病毒感染和致瘤基因表达、以及宿主细胞瘤基因过表达。从健康献血员采集新鲜血液样本,分离出正常人淋巴细胞,分别保存正常淋巴细胞,复制体外EBV转化淋巴母细胞模型和SCID小鼠体内EBV诱发瘤模型。采用人类全基因组表达谱芯片进行检测,分析正常淋巴细胞与体外EBV转化淋巴母细胞、正常淋巴细胞与体内EBV诱发淋巴瘤的差异表达基因。本实验复制出EBV体外转化淋巴母细胞模型和在hu-PBL/SCID小鼠体内EBV诱发弥漫大B细胞淋巴瘤模型,且每例样本为同一遗传背景。运用高通量基因芯片和生物信息学分析技术得出:正常人淋巴细胞和EBV转化淋巴母细胞及正常人淋巴细胞和EBV诱发瘤在全基因表达谱均存在明显差异,前者筛选出4821个上调基因,2621个下调基因;后者筛选出2830个上调基因,1550个下调基因。通过对宿主细胞差异基因表达谱进行层次聚类分析,我们首次发现EBV转化淋巴母细胞和EBV诱发淋巴瘤的基因表达模式相似。采用实时定量PCR检测进行验证,与正常人淋巴细胞比较,在EBV转化淋巴母细胞和体内EBV诱发淋巴瘤中BCL6基因转录表达水平降低,E2Fl基因转录表达水平升高。淋巴瘤的发生是通过多层次、多通路、协同作用产生的,本实验研究结果为筛选肿瘤相关基因、探查EB病毒作为致瘤因素诱导宿生细胞转化和肿瘤发生的分子作用途径指明了方向。更多还原