人肝前体细胞定向成熟肝实质细胞分化的体外研究

【作者】 张伟涛； 李卫红； 刘保清； 王萍； 李文； 张海燕；

【机构】 首都医科大学基础医学院细胞生物学系；

【摘要】 本研究旨在建立体外定向诱导人胚肝前体细胞(hFHPCs)分化为成熟肝实质细胞的高效体系。利用实时定量PCR方法比较了HGF,OSM和地塞米松(DEX)三者单独或联合作用对hFHPCs中ALB mRNA水平表达的影响。结果显示,OSM,DEX和HGF(ODH)三者联合作用能显著地促进ALB mRNA水平的增加,且呈现出时间依赖性,即ODH作用3天后,ALB mRNA的水平是诱导前的4.5倍;而肝前体细胞特征性蛋白-AFP的mRNA和蛋白的表达则随着ODH作用而逐渐降低,作用7天后,免疫细胞化学不能检测细胞内AFP的表达。PAS染色方法测定ODH诱导后细胞内糖原的合成,结果显示,诱导5,7和9天后约有33.97±2.4%,64.75±3.7%和86.69±1.7%的细胞呈PAS阳性。ELISA法测定ODH诱导组和对照组细胞24小时培养上清ALB的分泌量,结果显示,ODH作用7天后,ALB的分泌量明显高于对照组。生化分析仪测定诱导后细胞代谢氨的能力,结果显示,作用7天后,ODH组细胞尿素合成量明显高于对照组。PROD测定诱导后细胞CYP450的活性,结果显示,ODH作用5天后约有20.5±3.3%的细胞呈PROD活性,作用7天后,阳性细胞比例增至52.1±3.7%。上述结果表明,本研究所建立的诱导体系能高效获得大量的肝实质细胞,可用于肝脏药物的预临床实验和测试研究。更多还原