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沙子岭猪脂联素基因的克隆及真核表达
【作者】 罗佳捷； 宋虎威； 张彬； 李丽立； 陈宇光； 吴力专； 范觉鑫； 占今舜；
【机构】 湖南农业大学动物科学技术学院； 中国科学院亚热带农业生态研究所动物生态营养与健康养殖联合实验室农业生态工程重点实验室；
【摘要】 根据GenBank上登录的猪脂联素(ADPN)基因序列设计引物ADPN-P1和ADPN-P2,用PCR技术从沙子岭猪脂肪组织cDNA中扩增出ADPN基因,将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD-ADPN,并挑选阳性克隆进行测序。将该基因重组至真核表达载体pPICZaA,构建沙子岭猪脂联素基因酵母重组表达载体pPICZaA-ADPN,以电转化的方法将重组表达载体转化到毕赤酵母GS115中,构建沙子岭猪脂联素基因重组酵母表达菌GS115-ADPN,用甲醇诱导培养,对分泌表达到培养液中的目的蛋白进行Western Blot和Bradford检测。结果表明,沙子岭猪脂联素基因大小为732bp,共编码244个氨基酸,与GenBank中公布的猪脂联素基因序列的同源性为100%;Western Blot和Bradford检测表明脂联素在GS115菌株中得到了正确的分泌表达,并具备一定的免疫活性,其蛋白表达水平为28.5μg/mL。因此,本研究构建的真核表达载体pPICZaA-ADPN能有效表达重组猪脂联素蛋白。
【基金】 国家自然科学基金项目(30671516,31072053);教育部高等学校博士学科点专项科研基金(博导类)项目(20104320110001);湖南省高等学校基础研究重点项目(08A029)资助
- 【会议录名称】 “生泰尔”杯全国养猪技术征文大赛——中国畜牧兽医学会养猪学分会五届三次理事会暨生猪产业科技创新发展论坛论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会养猪学分会五届三次理事会暨生猪产业科技创新发展论坛
- 【会议时间】2012-08-01
- 【会议地点】中国吉林长春
- 【分类号】S828
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会养猪学分会(Pig Branch of China Association of Animal and Weterinary Medbicine)