维甲酸对鸡胚生殖细胞减数分裂调控机理的研究

【作者】 于敏莉； 俞萍； 米玉玲； 张才乔；

【机构】 浙江大学动物科学学院动物医学系；

【摘要】 减数分裂是生殖细胞特有的分化形成配子的过程,且在雌雄两性的发生时间不同。雌性卵巢内生殖细胞在胚胎期即开始进入减数分裂,并停滞在减数分裂Ⅰ期。但在胚胎期睾丸中,因为维甲酸(RA)被其代谢酶CYP26B1降解,使生殖细胞停滞在有丝分裂G0/G1期。在本实验中,我们结合胚胎期卵巢的体外培养和RNA干扰等手段,探索RA对鸡胚胎期生殖细胞减数分裂的调控及作用机制。SCP3和γH2AX免疫荧光染色结果表明,鸡胚卵巢内生殖细胞在15.5天进入减数分裂,其比例逐渐增加。到18.5天时,进入减数分裂的细胞几乎遍布整个卵巢。减数分裂早期标志基因Strs8 mRNA的表达在12.5天开始上调,而减数分裂标志基因Scp3和Dmc1mRNA的表达则在15.5天显著上调,再次验证鸡胚卵巢生殖细胞在15.5天进入减数分裂。RA合成酶基因Raldh2在15.5天显著上调而降解酶Cyp26bI却逐渐下降,表明Raldh2在RA聚集并维持减数分裂中起着重要的作用。RA受体RARβ在此过程略微升高。在雄性睾丸中,这些基因的表达变化很小,一直保持在较低水平。10.5天和12.5天鸡胚卵巢在无血清的体外培养体系中分别培养5天和3天后,生殖细胞能自发启动减数分裂;添加RA能显著上调减数分裂相关基因mRNA的表达水平。Raldh2 shRNA干扰可显著抑制RA对减数分裂启动的诱导作用。以上结果表明,Raldh2在RA合成及RA信号通路对生殖细胞减数分裂启动中有着重要的调控作用,并首次报道了Raldh2基因敲减可显著抑制生殖细胞进入减数分裂。更多还原