安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因的表达及免疫保护性研究

【作者】 陈建； 任文陟； 宫鹏涛； 李建华； 杨举； 李赫； 张国才； 张西臣；

【机构】 吉林大学畜牧兽医学院；

【摘要】 以筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因的序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组表达载体pET-28a-CA42,通过大肠杆菌BL21的诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western blotting鉴定。然后纯化重组蛋白,免疫BALB/c进行体液和细胞免疫水平的检测,并观察重组蛋白对微小隐孢子虫的交叉保护性效果。结果显示,重组原核表达质粒pET-28a-CA42构建成功,Western blotting显示重组蛋白约为19ku,能被安氏隐孢子虫免疫小鼠的多克隆抗体识别。重组蛋白免疫BALB/c小鼠的抗体水平差异显著(p<0.05),CD4~+T淋巴细胞数差异均显著,CD4~+/CD8~+T淋巴细胞数的值与佐剂对照组和空白对照组相比差异均显著(P<0.05)。(P<0.05)。各组小鼠经口服微小隐孢子虫卵囊后,试验组与各对照组相比减虫率为32.2%,差异均显著(P<0.05)。结果表明,成功表达了重组安氏隐孢子虫肌动蛋白,纯化的重组蛋白具有一定的免疫原性和交叉保护性。更多还原